Epi-Fluorescence显微镜
约翰·Sebastiaan Ploem 1927年出生于Sawahlunto(苏门答腊)作为荷兰的煤矿工程师的儿子。在他的童年他与他的父母回到荷兰,在那里他确立了绘画作为他的爱好之一。高中毕业后,他发现了另一个迷人的颜色我们将学习。Ploem决定学医,在乌得勒支受过教育,哈佛和阿姆斯特丹。一篇学术生涯之后,期间他在迈阿密和阿姆斯特丹大学的工作被提升为教授之前莱顿的医疗部门,荷兰。188bet怎么注册
他发现在他的研究活动荧光显微镜作为一个强大的工具。在1960年代的一种特殊类型的标本照明成为流行,这实际上是已知和描述在1925年由Policard Paillot,桑蚕的自体荧光活动感兴趣的人(Policard Paillot, 1925)。一些研究人员重新启动两个法国科学家的项目将荧光照明和检测样本在同一边的显微镜。这一原则的入射光被称为“Epi-Illumination”,站在透射显微镜相比。使用此技术的一大优势荧光显微镜是避免发射光的检测由光源(图1)。更多的机械特性的另一个好处是:在传播照明、冷凝器和客观有两个独立的光学轴必须小心保持一致。epi-illumination目标是:冷凝器和进入目标。像这样,对齐问题是可以避免的。
不幸的是由于缺乏信息交换在铁幕,Ploem不知道在俄罗斯的发展。然而他自己开始使用双色束器。Ploem的特殊情况,他开发了一个分束器一起著名制作人专业眼镜Schott(美因茨),它反映了蓝色和绿色的光(Ploem, 1965)。当他修改一个“Opak”epi-illuminator中性分束器造成的Leitz则188金宝搏怎么注册公司之后,通过引入一个滑块四个不同的双色束器他可以实现非常快和容易改变之间的激发光波长紫外线,紫罗兰色的,蓝色的和绿色(Ploem, 1967)(图4)。
荧光滤光片数据集
双色束器创建的发展与离散波长的激发光的一个重要优势。激发的紫外线光谱(~ 100 nm - 380 nm)当时很常见,但一个恼人的副作用:自发荧光。很多组织物质兴奋不已紫外线光,导致发光微弱的背景(图5)。通过拟合二向色镜的反射波长范围绿色或蓝色,Ploem能够达到两种荧光染料的激发极大值FITC(494 nm)和TRITC(541海里),在这些时候使用很普遍,没有生产autofluorecence。FITC(异硫氰酸荧光素)和TRITC (Tetramethylrhodamine-5 -(6)异硫氰酸酯)可以耦合到抗体和仍用于免疫荧光显微镜。按他们的激发极大值在一个小范围内,组织标本的对比增强明显(图5)。产生的激发光束与Ploem双色束器激发最大的安装FITC所以有效,即使是光源和一个很坏的发射光谱可以被使用。
考虑到这些事实,现在可以使用的优势epi-illumination通过应用窄带激励与蓝色和绿色,与普通高压汞弧灯供电。此增强功能满足即将到来的荧光显微镜在生命科学和医学的需求。
Leitz则Ploem的发明,设计了一种新的多波长荧光epi-illuminator有四个旋转双色束器可以激发标本的范围紫外线紫色,蓝色和绿色的光:Leitz则PLOEMOPAK。
Leitz则进一步成就是由员工w·卡夫,他结合二向色分束器充分激发和发射过滤器一起在一个工件,一个所谓的过滤器立方体或过滤块(卡夫1969和卡夫,1972)(图6)。他的调查导致了设计的epi-illuminator几组的四个过滤数据集仍然是几乎每一个今天多波长荧光显微镜的基础。
总结
与技术基础建立Ploem和他同时代和接班人,我们享受今天看无数不同的特权荧光团与适当的过滤数据集放入epi-illuminator(图7)。研究人员甚至可以构建自己的数据集定制需要激发和发射参数。
由于自动化的现代研究显微镜,切换过滤数据集在一个实验并不是一个多点击一个按钮。科学家可以在一刹那之间切换不同的荧光团,因此可以看到甚至生活标本荧光标记不同的记者。
引用
- Brumberg, e . M。,Krylova, T. N.: O fluoreschentnykh mikroskopopak. Zh. obshch. biol.14、461、1953。
- Ploem, j·S。:死Moglichkeit der Auflichtfluoreszenzmethoden贝Untersuchungen冯Zellen Durchstromungskammern和Leightonrohren。Xth研讨会d。法理社会f。Histochemie, 1965。Acta Histochem。生理7,339 - 343年,1967年。
- Ploem, j·S。:使用一个垂直的和可互换的二向色镜照明器荧光显微镜与入射光。Zeitschr。威斯康星州。Mikroskopie 68年,129 - 142年,1967年。
- 卡夫,W。:Leitz则Technologie des Fluoreszenzopak死去,手套。威斯康星州。u。中欧。IV / 6239 - 242年,1969年。
- 卡夫,W。:荧光显微镜和仪器的要求。Leitz则手套。威斯康星州。u。中欧。193 - 206 V / 7日,1972年。
- Policard,。,Paillot, A.: Etude de la sécrétion de la soie à I'aide des rayons ultraviolets filtrés (lumière de Wood). Comptes Rendus de l'Académie des Sciences Paris 181, 378–380, 1925.
