故事

荧光染料

概述

荧光显微镜的一个基本原理是在荧光剂的帮助下对细胞成分进行高度特异性的可视化。例如,这可以是荧光蛋白绿色荧光蛋白-基因上与感兴趣的蛋白质有关。如果克隆是不可能的,例如在组织样本中,就需要使用免疫荧光染色等其他技术来可视化感兴趣的蛋白质。为此目的,抗体被利用,这些抗体被连接到不同的荧光染料,并直接或间接地结合到适当的目标结构。此外,在荧光染料的帮助下,荧光显微镜不仅局限于蛋白质,也为核酸、聚糖和其他结构的染色提供了机会。甚至像钙离子这样的非生物物质也能被检测到。本文介绍了常用的荧光剂。

作者

主题和标签

免疫荧光

在荧光显微镜中,有两种方法可以想象您的蛋白质。借助于内在荧光信号的帮助 - 这意味着通过克隆并因此将荧光蛋白与靶蛋白遗传地连接到靶蛋白。或者借助于荧光标记的抗体,其特异性地结合到感兴趣的蛋白质。对于一些生物学问题,执行后者更有用甚至是必要的。例如,在组织学样品的情况下,例如,由于通常,不可能使用荧光蛋白,所以样本衍生自未容纳任何荧光蛋白的生物体。此外,如果功能性抗体可用,免疫荧光比荧光蛋白技术要快得多,您必须克隆感兴趣的基因并将DNA转染到足够的细胞中。荧光蛋白的另一个缺点在于它们本身的性质。用它,它们在细胞内具有特定的蛋白质特性,这可能导致关于感兴趣的附带蛋白质的功能障碍或误解。然而,应该认为使用荧光蛋白通常是观看活细胞的选择方法。

免疫荧光利用抗体对其抗原的非常特异的结合亲和力。这可能有两种不同的外观。最简单的方法是使用一种荧光标记抗体,该抗体与感兴趣的蛋白质结合。这叫做直接免疫荧光

在大多数情况下,使用两种形式的抗体。第一个与目标蛋白结合,并且自身没有荧光标记(1)抗体)。但是第二个(2nd抗体),其结合1抗体特异性携带荧光染料。这种方法称为间接免疫荧光它有几个优点。一方面,这是一个放大效应,因为不止一个2nd抗体与1结合抗体。另一方面,不必总是用荧光染料标记针对你喜欢的蛋白质的抗体,而是使用商用荧光标记2nd抗体。广泛使用的免疫荧光荧光染料是FITC、TRITC或几种Alexa Fluor®以下提到的染料。

FITC与TRITC

异硫氰酸荧光素(FITC)是一种有机荧光染料,仍用于免疫荧光和流式细胞术。它在495/517 nm处有一个激发/发射峰,并可以借助其活性异硫氰酸酯基团与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑基、酪氨酸或羰基结合到不同的抗体上。它的基本形式-荧光素-的摩尔质量为332 g/mol,常被用作荧光示踪剂。FITC(389 g/mol)是第一个用于荧光显微镜的染料,并作为进一步荧光染料的起源,如Alexa Fluor®488.其荧光活性是由于其大的共轭芳族电子系统,其在蓝色光谱中被光激发。

一种染料,通常与染料同时使用FITC是其相似的发声伙伴TRITC(四甲基罗丹明-5-(和6)-异硫氰酸酯)。与FITC, TRITC不是荧光素,而是荧光素的衍生物若丹明家庭。罗丹明也有一个很大的共轭芳香电子系统,这导致了它们的荧光行为。相比FITC, TRITC (479 g/mol)被绿色光谱中的光激发,在550 nm处最大。其最大发射波长为573 nm。与蛋白质(如抗体)的结合也是基于反应性异硫氰酸酯基团。

即使FITC和TRITC仍在使用,它们是相当弱的荧光染料,不推荐在最先进的显微镜下使用。他们的利润是以经济价格为基础的。

这一相对较小的荧光染料集合来自于花菁,这也是它们名字的起源:Cy2Cy3Cy5Cy7. 它们都可以通过反应基团与核酸或蛋白质连接。例如,对于蛋白质标记,使用马来酰亚胺基团。有趣的是,关于荧光,Cy5对其电子环境很敏感。这可用于酶的测量。附着蛋白的构象变化导致荧光发射的正或负变化。此外,Cy3和Cy5可用于烦恼实验。菁染料是比较古老的荧光染料,是其他荧光染料的基础,具有更高的亮度、光稳定性、量子产率等。

Alexa Fluor®染料

Alexa Fluor®染料是一种大组带负电和亲水性荧光染料,其通常在荧光显微镜中使用。他们的上诉人回到了他们的发明家理查德保罗海贵,他在他的儿子Alex Haugland之后命名为染料。标签是分子探针的商标(附属公司生命技术)。此外,在其标记中提到了各自的激光激发波长。例如非常广泛使用Alexa Fluor®488最大激发波长为493 nm,允许使用标准488 nm激光进行激发。Alexa Fluor®488的最大发射波长为519 nm®488的性质与FITC.虽然Alexa Fluor®488是一种荧光素衍生物,与FITC具有较好的稳定性、亮度和较低的pH敏感性。所有的Alexa Fluor®染料是不同碱性荧光物质的磺化形式,如荧光素、香豆素、菁或罗丹明(例如。Alexa Fluor®546Alexa Fluor®633)。其摩尔质量范围为410至1400 g/mol。

脱氧核糖核酸染色

在荧光显微镜中,不仅蛋白质结构值得研究,而且核酸也值得研究。有时有必要通过检测细胞核来确定细胞的确切位置或数量。最常见的DNA染色之一是大皮(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),与DNA双螺旋富含A-T的区域结合。与未结合态相比,DAPI与DNA结合时荧光强度增加。它因紫外线-最大波长为358 nm的光。发射光谱宽,峰值为461nm。弱荧光也可检测到RNA结合。在这种情况下,发射移到500纳米。有趣的是,DAPI能够渗透完整的质膜。因此,它可以用于固定细胞,也可以用于活细胞。

第二次广泛使用的DNA染色选项是Hoechst染料的家族,最初由化学公司Hoechst AG生产​​。188金宝搏怎么注册赫斯特33258赫斯特33342,赫斯特34580是双苯甲酰亚胺,具有插入A-T丰富区域的倾向,因此后者不经常使用。类似于DAPI,它们被激发紫外线-在未绑定条件下,光和光的最大发射波长为455nm,移动到510–540nm。Hoechst染色剂也具有细胞渗透性,因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同的是它们的毒性较低。

膜不可渗透的DNA染色是碘化丙啶在细胞培养中,由于不能进入完整的细胞,它通常用于区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种插层剂,但对不同的碱基没有结合偏好。在核酸结合状态下,其最大激发波长为538 nm。最大发射波长为617 nm。未结合的碘化丙啶碘化铀的激发和发射最大值被转移到较低的波长和强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA,必须使用足够的核酸酶。

一种无需事先操作就能在DNA和RNA之间产生差异的染料被称为吖啶橙色.它的激发/发射对在DNA结合态为502 nm/525 nm,在RNA结合态为460 nm/650 nm。此外,它还能进入酸性室,如溶酶体。在那里阳离子染料被质子化了。在酸性环境中,吖啶橙被蓝色光谱中的光激发,而橙色区域的辐射最强。因为凋亡细胞有很多被吞噬的酸性隔间,这使得它成为这些类型细胞的常用标记物。

隔室和细胞器特异性染料

在荧光显微镜下,染色细胞室如溶酶体或核内体和细胞器如线粒体是合理的。为此,本节将介绍一种特定染料的调色板。

一种众所周知的观察线粒体的方法是利用MitoTracker®.这是一种细胞可渗透染料,含有轻度硫醇反应的氯甲基部分。它可以通过与半胱氨酸残基的游离硫醇反应与基质蛋白共价结合。MitoTracker®存在于不同的颜色和修改(表1)。是分子探针的商标。与传统的线粒体不同的是,特定的染色罗丹明123tetramethylrosamine, MitoTracker®用固定物破坏膜电位后不被冲洗掉。

根据线粒体染色法,也有一些染料标记酸性区域,如溶酶体,它们被称为LysoTracker这些是与荧光团相连的膜渗透性弱碱。由于质子化作用,这些碱基很可能与酸性隔室有亲和力。溶菌酶抑制剂也有不同的颜色(表1)。

与溶酶体类似的一个隔间是类真菌中的液泡酿酒酵母这种膜封闭的空间也是酸性的。在荧光显微镜下观察它的一种方法是使用苯乙烯基染料,如调频4-64®调频5-95®

当涉及到蛋白质分泌实验时,内质网(ER)是一个特别有趣的部分DiOC6 (3).它偏爱ER,但仍然与线粒体等其他膜结合。另一种染色急诊室的方法是使用ER-Trackers像er-tracker绿色和红色。两者都是与Glibenclamide的基于Bodipy的染料 - 磺酰脲 - 它与ATP敏感钾通道结合在ER膜中。BODIPY(硼二吡咯乙烯)描述了一组相对pH不敏感的染料,它们几乎都是水不溶性的。这并不能使它们成为蛋白质标记的很好工具,但可以用于脂质和膜标记。

与ER的相邻隔室 - Golgi Appararatus - 可以用荧光神经酰胺类似物标记NBD C6神经酰胺Bodipy fl C5-神经酰胺.酰胺是鞘脂,其在高尔基装置中高度富集。

借助于进一步的脂基染料,可以染色特殊的膜区域,如脂筏。这些富含胆固醇的域可以通过使用NBD-6胆固醇NBP-12胆固醇在其他人中 (Avanti Polar Lipids.)。

除了使用特殊的非蛋白荧光染料来标记细胞间隔外,还可以在蛋白质的帮助下对感兴趣的区域进行染色,这些蛋白质在细胞中的不同位置具有偏好。这些蛋白质可以连接到荧光染料上,并在荧光显微镜下显示。这种方法的一个例子是小麦胚芽凝集素(WGA)的使用,它能特异性地与存在于质膜中的唾液酸和n -乙酰氨基葡萄糖结合。将WGA偶联到荧光染料上。用它可以观察质膜。

离子成像

在神经元研究中,例如基因活性或细胞运动,了解细胞的离子浓度是很有意义的。钠、钙、氯或镁离子对许多不同的细胞活动有深刻的影响。通常,离子可以在荧光标记螯合剂的帮助下被捕获,当与适当的离子结合时,螯合剂改变了它们的光谱性质。这道德原则是实现在钙指标Fura-2,Indo-1,Fluo-3,Fluo-4钙绿色例如

对于钠检测,SBFI(sodium-binding benzofurzanisophthalate)或钠绿是常用的。PBFI(与钾结合的苯并呋喃异酞酸盐)检测钾离子。

有趣的是,还有以蛋白质为基础的钙指标。其中一种是基于水母的化学发光蛋白发光蛋白质.AEQUORIN,发光体共塞仑,分子氧和CA的相互作用2+导致释放蓝光 - 一个非常突出的机制发现荧光蛋白

荧光染料及其激发和发射波长峰值

下表列出了上述所有染料。此外,还提到了其他荧光染料及其激发和发射波长峰。

表1
样品荧光染料 排放
吲哚-1,钙饱和 331纳米 404nm
Indo-1 Ca2+ 346海里 404nm
级联蓝BSA pH值7.0 401nm 419 nm.
级联蓝色 398 nm. 420 nm.
LysoTracker蓝色 373纳米 421 nm.
Alexa 405. 401nm 421 nm.
溶sosensor蓝色pH 5.0 374纳米 424纳米
Lysosensor蓝色 374纳米 424纳米
DyLight 405 399 nm. 434纳米
DyLight 350 332纳米 435纳米
蓝色荧光蛋白 380海里 439海里
亚历克斯350 343纳米 441海里
7-Amino-4-methylcoumarin pH值7.0 346海里 442海里
氨基香豆素 345纳米 442海里
AMCA共轭 347海里 444 nm.
香豆素 360纳米 447纳米
7-Hydroxy-4-methylcoumarin 360纳米 447纳米
7-Hydroxy-4-methylcoumarin pH值9.0 361纳米 448纳米
6, 8-Difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin pH值9.0 358海里 450海里
赫斯特33342 352纳米 455 nm.
太平洋蓝色 404nm 455 nm.
赫斯特33258 352纳米 455 nm.
Hoechst 33258-DNA 352纳米 455 nm.
太平洋蓝抗体结合pH 8.0 404nm 455 nm.
PO-PRO-1 434纳米 457纳米
PO-PRO-1-DNA 435纳米 457纳米
POPO-1 433 nm. 457纳米
POPO-1-DNA 433 nm. 458纳米
DAPI-DNA 359海里 461海里
大皮 358海里 463海里
滨蓝 362纳米 464海里
SYTOX Blue-DNA 445纳米 470纳米
青色荧光蛋白 434纳米 474海里
增强型青色荧光蛋白 437纳米 476海里
1-苯胺基萘-8-磺酸(1,8-ANS) 375纳米 479纳米
吲哚-1,无钙 346海里 479纳米
1,8- ans(1-苯胺萘-8-磺酸) 375纳米 480纳米
BO-PRO-1-DNA 462海里 482纳米
BOPRO-1 462海里 482纳米
BOBO-1-DNA 461海里 484海里
Syto 45-DNA 451海里 486海里
evoglow-Pp1 448纳米 495纳米
EVOLOW-Bs1 448纳米 496海里
EVO-Bs2 448纳米 496海里
Auramine O. 431 nm. 501 nm.
DIO. 487海里 501 nm.
pH值5.0 447纳米 502 nm.
Cy 2 489 nm. 503海里
LysoSensor绿色 447纳米 504纳米
呋喃-2,高钙 336海里 504纳米
呋喃-2钙2+sup> 336海里 505纳米
SYTO 13-DNA 488 nm. 506海里
YO-PRO-1-DNA 491纳米 507海里
YOYO-1-DNA 491纳米 509海里
增强型绿色荧光蛋白 488 nm. 509海里
Lysotracker绿色 503海里 509海里
绿色荧光蛋白(S65T) 489 nm. 509海里
Bodipy fl,meoh 502 nm. 511海里
蓝宝石 396纳米 511海里
BODIPY FL共轭 503海里 512 nm.
有丝分裂跟踪器绿 490 nm. 512 nm.
绿色调频收音机 490 nm. 512 nm.
荧光素0.1 M NaOH 493纳米 513 nm.
钙黄绿素pH值9.0 494纳米 514海里
荧光素pH值9.0 490 nm. 514海里
钙黄绿素 493纳米 514海里
呋喃-2,无钙 367海里 515纳米
Fluo-4 494纳米 516纳米
美国食品药物管理局 495纳米 517纳米
多达 495纳米 517纳米
荧光素 495纳米 517纳米
荧光素抗体缀合物pH 8.0 493纳米 517纳米
CFDA 495纳米 517纳米
FITC 495纳米 517纳米
Alexa Fluor 488肼水 493纳米 518纳米
DyLight 488 493纳米 518纳米
5-FAM pH值9.0 492纳米 518纳米
FITC抗体结合物pH值8.0 495纳米 519纳米
亚历克斯488 493纳米 520纳米
罗丹明110 497海里 520纳米
罗丹明110 pH 7.0 497海里 520纳米
吖啶橙色 431 nm. 520纳米
Alexa Fluor 488抗体结合物pH 8.0 499海里 520纳米
BCECF pH值5.5 485海里 521海里
picogreendsdna定量试剂 502 nm. 522海里
SYBR绿色我 498海里 522海里
罗达明绿pH 7.0 497海里 523海里
CyQUANT GR-DNA 502 nm. 523海里
NeuroTrace 500/525,绿色荧光Nissl染色RNA 497海里 524 nm.
DansylCadaverine 335海里 524 nm.
Rhodol Green抗体偶联pH 8.0 499海里 524 nm.
氟 - 祖母绿 495纳米 524 nm.
尼氏小 497海里 524 nm.
荧光素右旋糖酐pH 8.0 501 nm. 524 nm.
罗丹明绿色 497海里 524 nm.
5-(和-6)-羧基-2',7'-二氯荧光素pH值9.0 504纳米 525海里
丹西尔卡达林,我的 335海里 526纳米
eYFP(增强型黄色荧光蛋白) 514海里 526纳米
俄勒冈州绿488 498海里 526纳米
俄勒冈绿色488抗体偶联pH 8.0 498海里 526纳米
Fluo-3 506海里 527纳米
BCECF pH值9.0 501 nm. 527纳米
SBFI-Na+ 336海里 527纳米
Fluo-3 Ca2+ 506海里 527纳米
罗丹明123,MeOH 507海里 529海里
闪光 509海里 529海里
钙Green-1 Ca2+ 506海里 529海里
镁绿 507海里 530海里
DM-NERF pH值4.0 493纳米 530海里
钙绿色 506海里 530海里
黄水晶 515纳米 530海里
溶酶体传感器黄色pH值9.0 335海里 530海里
TO-PRO-1-DNA 515纳米 531纳米
镁绿毫克2+ 507海里 531纳米
钠绿钠+ 507海里 531纳米
TOTO-1-DNA 514海里 531纳米
俄勒冈州绿514 512 nm. 532海里
俄勒冈州绿色514抗体缀合物pH 8.0 513 nm. 533海里
NBD-X 466 nm. 534海里
DM-NERF pH值7.0 509海里 537 nm.
NBD-X,甲醇 467 nm. 538纳米
CI-NERF pH值6.0 513 nm. 538纳米
Alexa 430. 431 nm. 540纳米
Alexa Fluor 430抗体结合物pH 7.2 431 nm. 540纳米
CI-NERF pH值2.5 504纳米 541海里
路西法黄色,CH 428海里 542纳米
Lysosensor Yellow ph 3.0 389海里 542纳米
6-TET, SE pH 9.0 521海里 542纳米
曙红抗体结合物pH值8.0 525海里 546 NM.
曙红 524 nm. 546 NM.
6-羧基罗丹明6G pH 7.0 526纳米 547 nm.
6-羧吡啶胺6g,盐酸盐 525海里 547 nm.
Bodipy R6G SE 528纳米 547 nm.
BODIPY R6G,哦 528纳米 547 nm.
6乔 520纳米 548 nm.
级联黄色抗体偶联pH 8.0 399 nm. 549纳米
级联黄色 399 nm. 549纳米
mBanana 540纳米 553海里
Alexa Fluor 532抗体偶联pH 7.2 528纳米 553海里
Alexa 532 528纳米 553海里
红细胞-5-异硫氰酸酯pH9.0 533海里 554纳米
6-六角体,硒pH值9.0 534海里 559海里
莫兰奇 548 nm. 562纳米
莫奈德 478 nm. 562纳米
赛3 549纳米 562纳米
若丹明B 543纳米 565海里
DII. 551纳米 565海里
5-TAMRA-MeOH 543纳米 567海里
Alexa 555. 553海里 568海里
Alexa Fluor 555抗体结合物pH 7.2 553海里 568海里
DyLight 549 555海里 569 NM.
BODIPY TMR-X,东南 544海里 570海里
Bodipy TMR-X,Meoh 544海里 570海里
PO-PRO-3-DNA 539纳米 571 nm.
PO-PRO-3 539纳米 571 nm.
若丹明 551纳米 573纳米
Bodipy TMR-X共轭 544海里 573纳米
POPO-3 533海里 573纳米
Alexa 546 562纳米 573纳米
BODIPY TMR-X抗体结合pH 7.2 544海里 573纳米
橙色Ca钙2+ 549纳米 573纳米
TRITC 550纳米 573纳米
钙橙色 549纳米 574纳米
Rhodaminephalloidin pH值7.0 558 nm. 575纳米
MitoTracker橙色 551纳米 575纳米
Mitotracker Orange,Meoh 551纳米 575纳米
藻红蛋白 565海里 575纳米
镁橙色 550纳米 575纳米
R-Phycoerythrin pH值7.5 565海里 576海里
5-Tamra ph 7.0 553海里 576海里
5-塔姆拉 549纳米 577纳米
rhod-2. 552纳米 577纳米
调频1 - 472纳米 578海里
Rhod-2钙2+ 553海里 578海里
四甲基罗丹明抗体结合物pH值8.0 552纳米 578海里
调频1 -脂质 473海里 579海里
LOLO-1-DNA 568海里 580海里
dTomato 554纳米 581纳米
DsRed 563纳米 581纳米
Dapoxyl (2-aminoethyl)磺胺类药 372纳米 582 nm.
四甲基溴胺葡聚糖pH 7.0 555海里 582 nm.
氟红宝石 554纳米 582 nm.
Resorufin 571 nm. 584纳米
resorufin ph 9.0. 571 nm. 584纳米
姆坦格林 568海里 585纳米
LysoTracker红 578海里 589海里
Lissaminerhodamine 572纳米 590海里
Cy 3.5 578海里 591海里
Rhodamine Red-x抗体缀合物pH 8.0 573纳米 591海里
101年Sulforhodamine EtOH 578海里 593海里
JC-1 pH值8.2 593海里 595纳米
JC-1 592 nm. 595纳米
蓝莓 575纳米 596纳米
MitoTracker红 578海里 599海里
MitoTracker红、甲醇 578海里 599海里
X-RHOD-1 CA2+ 580海里 602 nm.
Alexa Fluor 568抗体缀合物pH 7.2 579海里 603 nm.
Alexa 568. 576海里 603 nm.
5-ROX pH值7.0 578海里 604 nm.
5-ROX(5-羧基- x -罗丹明,三乙基铵盐) 578海里 604 nm.
BO-PRO-3-DNA 574纳米 604 nm.
BOPRO-3 574纳米 604 nm.
BOBO-3-DNA 570海里 605海里
溴化乙锭 524 nm. 605海里
研究 597纳米 608纳米
钙红色 589海里 608纳米
深红色的Ca钙2+ 590海里 608纳米
mRFP 585纳米 608纳米
mCherry 587纳米 610海里
德克萨斯州红X抗体结合物pH 7.2 596纳米 613海里
hcr 590海里 614纳米
DyLight 594 592 nm. 616海里
乙锭同型二聚体-1-DNA 528纳米 617海里
Ethidiumhomodimer 528纳米 617海里
Propidium碘化 538纳米 617海里
Sypro Ruby. 467 nm. 618海里
碘化丙啶DNA 538纳米 619纳米
亚历克斯594 590海里 619纳米
博迪皮TR-X,东南 588海里 621海里
Bodipy Tr-X,Meoh 588海里 621海里
Bodipy Tr-x植物pH 7.0 590海里 621海里
Alexa Fluor 610 r phycoythrin streptavidin pH 7.2 567海里 627海里
YO-PRO-3-DNA 613海里 629 nm.
Di-8ANEPPS 469纳米 630海里
DI-8-anepps-脂质 469纳米 631纳米
YOYO-3-DNA 612纳米 631纳米
尼罗河红脂 553海里 636海里
尼罗河红色 559海里 637海里
DyLight 633 624纳米 646纳米
mPlum 587纳米 649海里
to-pro-3-dna 642纳米 657纳米
DDAO pH值9.0 648海里 657纳米
弗拉红色,高CA 434纳米 659海里
联素键合素pH 7.5 651 nm. 660海里
APC(均蛋白粘蛋白) 650海里 660海里
蓝色尼罗河,EtOH 631纳米 660海里
TOTO-3-DNA 642纳米 661海里
赛5 646纳米 664海里
BODIPY 650/665-X,MeOH 646纳米 664海里
Alexa Fluor 647 r藻红蛋白链霉亲和素pH 7.2 569 NM. 666纳米
DyLight 649 652 nm. 668海里
Alexa Fluor 647抗体偶联pH 7.2 653纳米 668海里
Alexa 647. 653纳米 669纳米
Fura红色Ca2+ 435纳米 670纳米
ATTO 647. 644纳米 670纳米
弗拉红,低CA 472纳米 673 nm.
Carboxynaphthofluorescein pH值10.0 600纳米 674 nm.
Alexa 660 664海里 691海里
Alexa Fluor 660抗体结合物pH 7.2 663 nm. 691海里
Cy 5.5 673 nm. 692纳米
Alexa Fluor 680抗体结合物pH 7.2 679海里 702海里
alexa 680. 679海里 703纳米
DyLight 680 678纳米 706海里
Alexa Fluor 700抗体结合物pH 7.2 696 NM. 719 nm.
Alexa 700 696 NM. 720海里
FM 4-64,2%CHAPS 506海里 751纳米
调频4-64 508纳米 751纳米

想知道更多吗?

与我们的专家交谈。我们很乐意回答所有问题和疑虑。

188金宝搏的网址联系我们

你更喜欢私人咨询吗?

  • 188金宝搏的网址徕卡微系统有限公司
    莱德巷1700号
    布法罗格罗夫伊尔60089 美国
    办公室电话:+1 800 248 0123
    188bet官网1服务电话:1 800 248 0223
    传真:+1 847-236-3009

您将在此处找到更详细的本地联系人列表。188金宝搏的网址