EPI荧光显微镜
Johann Sebastiaan Ploem于1927年出生于Sawahlunto（苏门答腊），作为荷兰煤矿工程师的儿子。在他早期的童年时期，他和父母回到荷兰，在那里他将绘画作为他的激情之一。完成高中，他发现了另一个迷人的颜色领域，因为我们稍后会学习。Ploem决定学习医学，并在Utrecht，哈佛大学和阿姆斯特丹教育。遵循学术职业，在此期间，他为迈阿密和阿姆斯特丹的大学工作，然后才晋升为荷兰莱顿的医学系教授。188bet怎么注册
在他发现的研究活动期间荧光显微镜作为一个强大的工具。20世纪60年代，一种特殊的标本照明开始流行起来，事实上，1925年对蚕的自身荧光事件感兴趣的波拉德和派洛特已经知道并描述了这种照明(波拉德和派洛特，1925年)。一些研究人员重新启动了这两位法国科学家的项目，将荧光照明和检测样品放在显微镜的同一侧。这种利用入射光的原理被称为Epi-Illumination“并与透射显微镜相比，并保持相反。使用该技术进行荧光显微镜的一个大优点是避免检测光源输送的发射光（图1）。另一个好处是一种更机械特性：在透射的照明中，冷凝器和物镜具有两个单独的光轴，必须仔细对准。在EPI光照中，目标是：冷凝器和光收集目标。像这样，可以避免对齐问题。
不幸的是，由于缺乏铁幕上的信息交换，Ploem不了解俄罗斯的发展。然而，他自己开始使用二向色束分离器。在Ploem的特殊情况下，他与特种眼镜的众所周知的生产者一起开发了一个分束器肖科(美因茨)，反射蓝光和绿光(Ploem, 1965)。当他修改一个“Opak”具有中性分束器的Epi-Illuminator贡献Leitz则188金宝搏怎么注册公司之后，通过引入滑块四个不同的二向色分束器可以实现非常快速和容易的激发光波长之间的变化紫外线，紫罗兰色的，蓝色的和绿色(Ploem, 1967)(图4)。
荧光过滤立方体
二向色束分离器的开发，以采用离散波长的励磁光具有重要的优点。刺激在刺激紫外线-光谱(约100nm - 380nm)在当时非常普遍，但有一个恼人的副作用:自发荧光．很多组织物质被紫外线- 导致淡淡的背景发光（图5）。通过将二向色反射器的反射波长拟合到绿色或蓝色范围，Ploem能够达到两种荧光染料的激发最大值FITC（494nm）和Tritc（541nm），其在那些时代通常使用，而不会产生自荧光。FITC（荧光素异硫氰酸酯）和Tritc（四甲基吡啶-5-（和6） - 硫氰酸酯）可以偶联与抗体，仍然用于免疫荧光显微镜。通过在较小范围内击中其激发最大值，显着增强组织样本的对比度（图5）。用Ploem的二向导分束器生产的励磁光束安装在最大值的激励中FITC如此高效，即使是发射光谱很差的光源也可以被使用。
考虑到这些事实，现在可以通过用蓝色和绿色的窄带激发来利用EPI照明的优点，用普通的高压汞弧灯供电。这种增强满足了生命科学和医学中荧光显微镜的即将到来的需求。
在Ploem的发明基础上，Leitz设计了一种新的多波长荧光增照器，它带有四个旋转的二色分束器，可以在一定范围内激发样品紫外线、紫色、蓝色和绿色的光:LeitzPloemopak.．
Leitz员工W. KRAFT完成了进一步的成就，他们将二向色束分离器组合在一起，在一个工件中使用足够的激励和发射过滤器，所谓的过滤器立方体或过滤器块（牛皮纸，1969 kraft，1972）（图。6）。他的调查导致设计具有多组四个这些过滤器立方体的ePI - 发光器，这些过滤器立方体仍然是目前几乎每个多波长荧光显微镜的基础。
概括
随着Ploem和他的同时代人和继任者建立的技术基础，我们今天享受了观看无数不同的特权荧光团研究人员甚至可以建立自己的立方体，根据自己的需要定制激发和发射参数。
由于现代研究显微镜的自动化，实验期间切换过滤器立方体并不多于点击按钮。科学家可以在分裂中切换不同的荧光团之间，因此可以观察荧光标记的荧光标记，与不同的记者标记。
参考
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- Ploem，J.S.:EedmöglichkeitderAuflichtfluoreszenzmethoden北unteruchungen von Zellen在Durchströmungskammernundleightonröhren。xth研讨会d。gesellschaft f。组织，1965. Acta组织。增刊7,339-343,1967。
- Ploem，J.S.:使用带有可互换的二向色镜的垂直发光器荧光显微镜与入射光。zeitschr。F。威斯。Mikroskopie 68,129-142,1967。
- 牛皮纸，w .: die technologie des fluoreszenzopak，莱特茨露台。威斯。你。中欧。IV / 6，239-242，1969。
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