教程

荧光显微镜滤光片手册

如何为您的外荧光或共聚焦应用选择光学滤光片

荧光显微镜和其他基于光的应用需要具有光谱和物理特性的滤光片。通常,这些特性是特定于应用程序的,一种光学可能适合和最佳的一个,但对另一个可能是不合适和次最佳的。《荧光显微镜光学滤光片手册》是Chroma Technology Corp.的工程师和科学家用来为各种荧光应用设计滤光片的原理汇编。虽然这里概述的原则是针对一般的显微镜,但它们在其他非显微镜应用中同样有效和重要。

本文给出了一般荧光原理的基本概述,以及epifluorescence显微镜的典型配置及其历史的简要概述。本文还详细介绍了典型荧光显微镜中使用的三种滤光片(激发/照明滤光片、发射/阻挡滤光片和二色镜)。

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滤光片及其光谱和物理特性

手册继续全面描述色度的术语和概念,用于描述光学及其光谱和物理特性。说明了长通/短通滤波器和带通滤波器之间的区别。滤波器的阻塞/衰减特性用光密度(OD)来描述和定义。简要概述了入射角(AOI)的重要性和给定光学器件的适当功能,然后考虑锥角对这些特性的影响。本节的最后一部分是光学偏振效应的描述。

介绍了传统的过滤材料,以及最近在过滤设计和制造方面的创新。简单的彩色玻璃滤光片,更先进的薄膜滤光片设计,声光和液晶可调滤光片,以及它们的相对优势和劣势都被讨论。

荧光色素、激发光源和光源

下一节将考虑在显微镜应用程序中实现出色成像结果的因素。氟铬的选择(单独使用或与其他氟铬一起使用),激发/照明源的选择和到达检测器的光质量的考虑都被讨论了。综述了表面质量(平面度、透射和反射波前畸变和楔形等),并描述了它们对最佳波束路径生成的影响。典型的表面规格列出了色度制造的光学。

图像配准

图像配准和显微镜内多重荧光的视觉重叠被考虑。在仪器内实现多个图像亚像素配准的能力被考虑到在这个过程中各种滤波器的效果描述。更多关于这个主题的信息可以在这里找到:http://www.chroma.com/sites/default/files/uploads/files/ImageRegisteredAppNote_0.pdf

共聚焦显微镜的滤镜

下面简要介绍共焦显微镜中使用的滤光片。有关专为激光应用而设计的光学和滤光片的更多信息和详细解释,请参阅我们的激光应用说明。http://www.chroma.com/sites/default/files/uploads/files/Laser_App_Note_1.pdf

还包括一个术语表,是由色度用来描述其滤光片的光学特性,以及讨论的原则的无数例证。

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