冷冻电子断层扫描

低温电子断层扫描(CryoET)用于将细胞环境中的生物分子分解到亚纳米范围内的前所未有的分辨率，为理解分子社会学打开了一扇窗口。这是一种单靠蛋白质的形状就可以识别的比例尺，不需要任何标记。但是亚纳米分辨率的成像有一个主要的挑战:你需要定位和精确地瞄准你感兴趣的部位。

来自徕卡微系统的先进低温et解决方案使用低温光显微镜进行快速、188金宝搏的网址高分辨率成像和图像数据的精确传输，同时在整个工作流程中保持最佳的低温条件。

需要帮助吗?

188金宝搏的网址联系我们以获得解决常见低温电子断层摄影工作流程挑战的专家建议。

什么是低温电子断层扫描?

冷冻电子断层扫描(也称为电子冷冻断层扫描)允许在蛋白质原生和功能状态下以三维分子分辨率分析蛋白质-蛋白质相互作用。样品在一系列二维图像中成像，因为它在控制的一系列位置上倾斜。然后将得到的图像“切片”组合起来，生成样本的3D重建。

在典型的CryoET工作流程中有哪些挑战?

与典型的CryoET工作流程相关的最大挑战是难以确定包含要成像的细胞或蛋白质的精确区域。目标定位的反复失败会导致耗时过程的多次重复，最终浪费昂贵的电子显微镜(新兴市场)成像时间。工作流程中的其他两个挑战包括确保样品质量和冰厚度始终一致，以及在样品转移到低温之前保持充分的玻璃化TEM．

CryoET工作流程的步骤是什么?

该技术涉及到样品的制备，将样品放在电子显微镜的栅格上，然后迅速将其冻结在液氮中，使样品玻璃化，防止冰晶的形成。

为了进行高分辨率低温层析成像，标本的成像切片厚度不应大于300纳米。为了观察标本的“较厚”部分，如细胞体，样品必须稀释。在低温超显微切开术旁，聚焦离子束(撒小谎)铣削使用专用或多模态低温扫描电子显微镜是选择的方法。两个离子束窗口以这样一种方式放置，即在感兴趣的区域创建约200纳米厚度的薄冰盖(片层)，使其可以被Cryo ET访问。

制备的样品现在可以用低温透射电子显微镜扫描，之后，必须进行数据重建过程，将2D图像重建为单个3D模型。

低温光显微镜如何克服CryoET的挑战?

低温光显微镜可以在两个重要方面对CryoET工作流程做出积极贡献。

首先，光学显微镜有助于评估样品的质量。低温光显微镜提供了样品的冻结质量和冰厚度的快速概述，以及样品的分布是否适合进一步处理。徕卡的低温溶液确保样品在这些步骤中保持安全和可行。

其次，低温光显微镜在提高工作效率方面的最大潜力是在CryoEM准备工作开始之前，能够更精确地瞄准感兴趣的结构。徕卡的低温光显微镜解决方案使图像和坐标输出的目标结构后续新兴市场步骤，从而大大减少新兴市场成像时间。

一个完整网格的聚焦概述，具有不同的模式，用于识别网格缺陷，用于对齐的地标和目标分布。HeLa细胞由Ievgeniia Zagoriy, Mahamid Group, EMBL海德堡，德国提供。蓝色的赫斯特,细胞核;绿色-线粒体追踪器绿色;红色-深红色的珠子和脂滴。栅格方边长90 μm，条宽35 μm。完整网格直径:3毫米

莱茵衣藻，两种不同类型的黄束内转运蛋白IFT-NeonGreen和IFT-mCherry。样本由德国德累斯顿马普分子细胞生物学和遗传学研究所pigino实验室提供。

介绍Coral Cryo:有效的CryoET工作流程

徕卡专用的3D低温电子断层摄影工作流程解决方案通过确保样本可行性、质量检查和最重要的是，精确和可靠的3D定位机制克服了典型的挑战。利用我们优化的硬件，包括低温stage和穿梭机，结合最先进的CryoET瞄准软件，以及各种无缝集成和低温转移选项撒小谎或VCT阶段。

了解更多

emcryo CLEM雷电成像仪

雷声成像仪新兴市场低温CLEM是一种具有光电雷技术的低温光显微镜。它提供成像数据和安全的低温条件，你需要成功的实验研究有关结构生物学。借助迅雷技术的高分辨率、无雾成像，精确识别感兴趣的细胞结构，然后将标本无缝传输到您的新兴市场．

了解更多

没有雷成像仪的海拉细胞

海拉细胞与雷声成像仪

HeLa与f -肌动蛋白染色(mcherry)， TGN46 (绿色荧光蛋白)和DNA (Hoechst 33342)。样本由玛丽-夏洛特·多玛特博士和露西·柯林森博士提供，英国伦敦弗朗西斯·克里克研究所

选择什么:低温广角还是低温共焦?

功能	共焦	雷(宽视野)
灵敏度		＊
速度		＊
横向分辨率	**	＊
轴向分辨率	**	＊
低温成像条件下染料激发和发射的优化	**	＊
抑制自身荧光(样品或碳层)	＊
目标和出口	3 d	二维

无缝冷冻电子断层扫描工作流程

解锁精确的3D体积目标

在这篇文章中，了解如何无缝冷冻电子断层摄影工作流程珊瑚低温由徕卡微系统使用共焦超分辨率目标更精确的结构感兴趣。188金宝搏的网址该工作流减少并优化了工作流步骤的数量，改善了样品加载和传输，从而提高了CryoET工作流的生产率。

了解更多

超分辨三维共焦图像与top的叠加扫描电镜视图(左面板)和撒小谎视图面板(右)。使用珠子作为相关标记进行叠加。HeLa细胞标记如下:核由Hoechst标记，蓝色;线粒体，MitoTracker绿色，绿色;脂滴Bodipy和Crimson Beads，红色)。比例尺:20 μm。细胞由Ievgeniia Zagoriy和扫描电镜/撒小谎图片由Herman Fung提供，mahamid集团，embl -海德堡，德国。