细胞超微结构研究进展

冻裂和冻蚀

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冷冻断裂和冷冻刻蚀是研究柔性膜相关结构如紧密连接或肠内糖萼的有用工具。冻裂法和蚀刻法是膜相关大分子暴露的两种互补方法,通过样品玻璃化保存目标结构,然后打破冷冻标本显示内部结构。冻结蚀刻是后续的步骤,表面冰在真空下升华,以揭示更多的细节。在这些技术中,涂上金属或碳使样品能够在低温中成像扫描电镜直接或以TEM作为一个复制品。这对技术用于研究细胞器、细胞膜、层和乳剂,对传统或低温电子显微镜无法分辨的柔性结构尤其有用。

这些技术的最终分辨率取决于生物表面复制的好坏。无定形碳复制比传统的金属涂层更好地复制生物细节,并使用相位对比电子显微镜,提供无与伦比的洞察这些难以捉摸的细胞成分。

主讲人:Evan Krystofiak博士。

Evan Krystofiak是范德比尔特大学细胞成像共享资源(CISR)核心设施的工作人员,使用传统和基于低温的方法组合为超过90个实验室执行电子显微镜。Krystofiak博士的主要研究兴趣在于了解原位细胞环境中的大分子超微结构。他的研究包括开发利用非晶复制品的高分辨率冷冻蚀刻,难以保存的样品的冷冻替代,以及傅立叶空间分析来理解生物旁晶填料。他利用这些技术检查了紧密连接纤维的结构,揭示了肠细胞糖萼的水合结构。

主要学习

  • 概述冻裂和冻蚀技术的基本方法
  • 讨论肠细胞糖萼和类似的原位细胞外结构的作用
  • 说明如何优化这些复制技术,以获得最大的生物细节

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