相位对比光显微镜

BrightField显微镜通常仅提供许多透明生物标本的低对比度图像,其中有很少的细节。一种方法来增强与明菲尔德显微镜的对比度是使用选择性污渍,但这种污渍通常对活细胞毒性毒性。相位对比度光学显微镜提供一种方法,可以在不需要污渍的情况下更大的对比度来观察许多类型的生物样本的结构。对比度方法利用样品的结构之间的光密度差异,导致与样本和结构相互作用的光的相移。

Leica显微镜提供关于各种生命科学和法医应用的细胞或组织研究的相位对比。相位对比度也可用于某些材料和地球科学应用。

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什么是相位反差?

相对比度是显微镜的光学对比度技术,其在生物样本的细胞中形成未染色的结构。使用BrightField照明看起来透明的细胞结构可以用相对对比度的高对比度和丰富的细节观察。电池结构之间的光密度之间的差异可以使光与它们相互作用以获得相移。这种现象是相位对比的基础。结果,更光学致密的结构看起来比光学密集的结构更暗。

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什么是一些相位造影显微镜用途?您可以想象哪种样本?

用相对造影显微镜观察最多的生物标本和组织。可以观察到各种各样的生物标本,从固定标本与活细胞和组织的相位对比。有关示例,请参阅文章:相衬光学对比方法

相差显微镜是如何工作的?

相位对比显微镜类似于传统的宽场显微镜,除了它使用环形的形状和四分之一波(λ/ 4)相板的孔。在显微镜光学器件内部的目标之后,将环形孔放置在光源和冷凝器透镜和相板之间。穿过孔的环形光通过冷凝器聚焦到要观察到的生物样本上。

部分环形光被样品的光学致密结构衍射,并经历约λ/4的负相移。这种相移的衍射光绕过λ/4平板。相反,部分环形光直接通过样品而没有偏移,将击中相位板,导致λ/4正相移。当由样品结构衍射的光与通过相板的光相移的总差约为λ/2时,就会发生破坏性干涉。因此,光学密度大的结构会比光学密度小的结构显得暗一些。

有关更多详细信息,请参阅文章:相衬

MDCK细胞,明场显微镜

MDCK细胞,相位对比显微镜

使用相移来形成图像

光学显微镜相衬显微镜

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常见问题相位对比显微镜

荷兰物理学家Zernike在20世纪30年代开发了显微镜的相位对比方法。在1942年之后,它成为广泛使用的显微镜​​技术。1953年,Zernike被授予诺贝尔物理奖。有关详细信息,请参阅文章:光学显微镜的简史 - 从中​​世纪阅读石头到超级分辨率相衬

相位反差显微镜与传统的亮场显微镜相似,不同的是它在光源前使用一个环形孔径,在物镜后使用一个四分之一波相位板。欲了解更多信息,请参阅文章:相衬

是的,相位反差显微镜可以配备摄像机来记录用反差法观察到的图像。

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