伤口愈合实验
进行伤口愈合实验的基本程序非常简单。在100%融合的单层细胞中产生人工无细胞间隙，并监测细胞闭合该间隙的能力。
为了得到可靠和可重复的结果，需要考虑和标准化许多参数。以下部分将介绍监视单元的一些一般方面，并演示PAULA如何帮助简化工作流任务。
由海拉细胞组成的伤口愈合实验视频。
合适的对比方法
在标准的亮场显微镜下，大多数细胞单层相对很难被发现，甚至“看不见”。通过相位对比，细胞的“形状”被突出显示，使细胞很容易被检测到。然而，使用相位对比的手动显微镜的设置可能是繁琐和耗时的，特别是对于未经训练的用户。一般来说，荧光可以用来监测迁移的其他因素。然而，它不应该用作标准的对比方法，因为光漂白和光毒性会显著改变迁移。
- PAULA提供了不需要微调的无对准相位对比。
- 只需点击一下就可以激活相位对比。
- 荧光对比(红色和绿色发射，如绿色荧光蛋白和dsRed标记细胞)可在需要时添加。
100%融合细胞层的伤口愈合试验
找到正确的时间点很重要。在大多数情况下，伤口愈合试验采用100%融合细胞层。当细胞达到100%合流时，保持细胞生长可以诱导细胞分离，甚至抑制邻近细胞。因此，找到正确的时间点开始伤口愈合试验是进行成功的实验产生有意义的结果的关键。
- PAULA通过电子邮件通知您当您的细胞已达到所需的汇合。
- 您不再需要到细胞培养实验室手动检查细胞。
- 你可以找到开始伤口愈合实验的最佳时机。
最佳的环境条件是至关重要的
伤口愈合分析通常使用所谓的“死角”分析。细胞烧瓶必须从培养箱中取出，并手动检查细胞，以确定缝隙何时完全闭合。这种方法既耗时又不准确。或者，细胞瓶可以保存在配有气候室的显微镜台上。原则上，这是可行的，但是温度和CO的波动2不能完全排除。那么，为什么不把这些细胞放在它们最可能生长良好的地方呢?这意味着在培养箱中有最优化的环境条件来培养细胞。
- PAULA可以放置在常规的细胞培养箱中，细胞在最佳条件下保存。
- 焦点在几天内是稳定的-不需要重新调整。
- PAULA获得延时记录，并立即计算当前迁移率和缺口闭合百分比，以及估计闭合50%的时间。
- 单元状态和结果可以从任何地方不断地监视。
将PAULA放入常规的细胞培养箱中，细胞在最佳条件下保存。
间隙大小一致很重要
在许多情况下，单分子膜上的无细胞间隙是用移液管尖手工制造的。划痕的大小很大程度上取决于施加在单层表面的压力。然而，为了得到可重复的结果，一致的划痕大小是重要的。
- 用宝拉的综合标尺确定准确的单元间隙宽度。
- 找到更容易比较的间隙大小不同的烧瓶。
- PAULA也可用于插入诱导的无细胞间隙，例如，从ibidi。
再现性的其他重要参数
除了间隙大小和环境条件外，还有其他因素可以影响伤口愈合试验的可重复性。例如，技术参数，如图像和采集设置和系统校准，以及样品条件，如细胞的传代数。PAULA监视这两种类型的参数。
- 宝拉可以记录细胞的传代号。通过这种方式，您可以随时知道是否真的在比较相似的细胞状态(苹果与苹果或橘子)。
- 回想一下您为某个特定样本使用的所有个人设置，包括参数的微调，如照明。
- 无需对系统进行额外校准。
伤口愈合试验易于建立
如果伤口愈合实验的设置简单，容易重复很多次，那么结果就更有可能是可重复的。看看自己是多么容易和不言自明的伤口愈合试验的设置与宝拉。一个成功的伤口愈合实验只需要3个步骤。
- 定义你的标本
- 定义t-lapse
- 确定感兴趣的区域
用宝拉细胞成像仪容易建立伤口愈合试验
结果统计
在一天结束的时候，结果才是真正重要的。
- PAULA提供了间隙闭合值和随时间迁移速率的图形显示。
- 用于间隙和速率计算的时间点可以任意定义，这样就可以消除划痕边界处死亡细胞的影响。
- 首先估计50%和100%间隙闭合的时间，然后计算实际值，如果达到。
- 所有数据可以显示在一个列表中，并导出到Excel文件。
