故事

什么是共振扫描器?

SP8共聚焦显微镜技术

共振扫描仪是一种电流镜扫描仪,它允许单点扫描显微镜(真共聚焦和多光子激光扫描)快速图像采集。需要高的采集速度来跟踪快速过程,特别是在活样品中。它还有提供更好的荧光信号和减少光漂白的额外好处(1)

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共振扫描速度

由于共振扫描器只会在一个确定的频率振荡,因此它缺乏位置和速度控制,但提供了最高的图像采集速度。目前徕卡扫描显微镜(2019年1月)使用频率高达12000 Hz的扫描仪。在双向扫描中,这相当于每秒24000行。一帧512行的记录只需要大约20毫秒。

像素时钟控制

在共振中,扫描仪只能像钟摆或孩子的秋千一样正弦地工作。因此,像素时钟必须与扫描仪的运动具有非线性同步。智能控制(图1)适应扫描器的振幅和相位。这样的改编使得整个视野得以展现。(2)以可自由调节的扫描分辨率进行扫描;也就是说,每行像素可以设置为任何整数,最多为2496。

X2Y扫描仪的设计

徕卡共振扫描仪采用三镜概念,与经典的双镜扫描仪相比,提供了优越的照明同质性。树镜的概念被称为“x2y扫描仪”。这种方法解决了带有两个反射镜的扫描仪系统的一般问题,如果没有附加的中继光学,这两个反射镜不能同时放置在正确的位置(后焦平面)。通常,通过妥协照明的均匀性(对亮度和分辨率的均匀性有负面影响),可以接受偏差。单镜解决方案(万向节/cardanic安装)提供均匀的照明,但限制非常低的扫描速度。

x2y扫描器均匀地照亮整个视场,并允许在y和x方向上的高扫描速度。

图1:演示x2y扫描仪概念原理的动画示意图。x2y设计确保总是正确填充物镜的入口瞳孔,仍然允许高扫描速度。

共振扫描装置由两个y扫描镜(标准非共振)与用于x方向的共振振量扫描仪组合而成。这样的组合允许在非常高的线路频率下扫描,高达每秒24000行(双向模式),而不影响同质性。两个低惯量镜的y移动足够快,以跟上高线路频率,这最终导致高帧率。研究活生物样本中时间分辨的快速过程需要较高的帧率。

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