解决方案
威斯康辛医学院的林克实验室研究眼部发育和188bet怎么注册疾病,专注于斑马鱼视网膜神经发生的模型。埃里克·克拉克(Eric Clark)是林克实验室的博士候选人,他试图创建斑马鱼整个大脑的全体积3D图像,其深度约为750微米,覆盖面积约为直径3毫米。为了对神经系统成像,动物首先在泛神经元启动子后面转染表达eGFP的结构,从而在中枢神经系统的神经元中产生无处不在的绿色荧光。
样品清理和物镜
为了减少由折射率(RI)变化引起的散射,采用被动清透法对分离的CNS样品进行清透。基于Histodenz的自定义折射率匹配方案被用来保持整个光路的RI一致。用徕卡HC flutar L 25x/1.00 IMM物镜对制备的器官进行成像[1],提供250纳米的光学分辨率,在约1mm x 1mm的领域,高达6毫米的自由工作距离。该物镜配有机动校正(motorcorr)项圈,可以对其进行调整,以补偿在深度的RI方差的影响。
采集高分辨率大场
为了从整个大脑中收集数据,Eric使用了磁片扫描功能拉斯维加斯X NAVIGATOR采集软件。Navigator允许用户简单地将光学图像堆栈记录在大量拼接的微观场中,并将它们融合到单个3D数据集,自动平衡拼接和采集过程中的强度变化。可以渲染生成的数据通过3D可视化软件包括3D查看器在内拉斯维加斯X(见电影图01)。
最终数据由286个图像平面组成,每个图像平面为5675 x 7836像素。总共12.7千兆体素。
光子效率和样品保护
用户的声音
“带电机的徕卡清晰物镜提供了匹配样品清除/安装介质的折射率的能力,并提供了扩展的工作距离和光收集能力,以成像这种敏感的样品在深度。”
埃里克·克拉克,威斯康星医学院博士候选人。188bet怎么注册威斯康星州密尔沃基(美国)
参考文献
- 深层组织成像清理程序
- 哪种传感器最适合共焦成像?
- 共聚焦显微镜主分束装置
- 光谱检测-如何定义收集探针特定发射的光谱波段