海马神经元在蓝宝石磁盘上培养。有关如何在出版物中找到有关如何准备海马文化和蓝宝石磁盘的详细信息：渡边等人；闪存冻结：与快速冷冻的光遗传学刺激协调以毫秒分辨率的突触时可视化膜动力学；正面。突触神经科学。2016年8月。
带有培养的神经元的6毫米蓝宝石盘放在中板的凹陷中（PCB）。小心地将垫片环（厚度为100 µm）仔细放在蓝宝石磁盘上，以便在完成另一个蓝宝石磁盘组装时不会损坏细胞。为了确保组件的稳定性，将盖环放在第二蓝宝石的顶部。在此组件中，这是至关重要的所有部分（图3）。
一旦将样品冷冻后，将转移到自动冻结替代单元中的预冷丙酮（-90°C）Leica EM AFS2。这冻结固定在1％四氧化os，1％戊二醛和1％MilliQ水中进行无水丙酮中的混合物进行。在-90°C，5°C/小时至-20°C，12-16小时以-20°C，10°C/小时至20°C保持样品5-30小时。一旦冻结固定，将标本嵌入了Epon/araldite树脂中的详细说明中，可以在Watanabe等人，2016年：Front。突触神经科学。
图3：组装两个半圆柱体和一个中间板 /PCB，用于左右的电刺激Em冰
