免疫 - 电子显微镜高压冷冻，冷冻取代小鼠心脏

协议HPF - AFS鼠标心脏IEM：
切除来自野生型（WT）和αt-catenin KO（KO）小鼠的小鼠心脏组织，浸入20％（w / v）bsa和冻结立即在高压冰箱中徕卡EM协议（188金宝搏的网址徕卡微系统，维也纳，奥地利）。

冻替代使用a进行徕卡efs.（188金宝搏的网址Leica MicroSystems）在含有2％DDH2O和0.1％戊二醛的干丙酮中的干燥丙酮如下：-90℃24小时，每小时2°C增加15小时，24小时，24小时，每小时2°C增加15小时，24小时增加-30℃。然后将样品在-30℃和0℃之间在-30℃和0℃之间在纯丙酮中洗涤3次，并缓慢升温至4℃，在4℃下逐步渗透，在LR-White中逐步渗透并嵌入胶囊中。聚合在徕卡进行em.AFS使用紫外线在20°C时从6天开始6天，以37°C结束。

超薄部分是使用超微问题制作的徕卡EM UC6并在徕卡染色em.AC20在乙酸铀酸盐中40分钟，在20℃下柠檬酸铅含铅10分钟。使用来自Ditabis（德国Pforzheim，德国Pforzheim）的图像板技术，用JEM 1010透射电子显微镜（JEOL，东京，日本）观看网格。如前所述进行免疫标签和标记量化（Goossens等，2007）。

以下初级抗体用于免疫 -em.：CX43-多克隆兔（1:50; SIGMA）和DESMIN多克隆兔（1:50; ABCAM）。在李等人的文章中。还显示了其他图像，处理（与徕卡em.契约和徕卡em.AFS）对于斯派（Spurr）的树脂和HM20（用Leica HPM010），但这没问题，我们在这里解释的协议是针对所示的图像。

有关详细信息，请参阅：Li等人，J细胞SCI 2012 125：1058-1067;DOI：10.1242 / JCS.098640

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