图1 - 3:拟南芥初生根细胞PIN1pro::PIN1=的超微结构研究绿色荧光蛋白bex5-1用50 uM BFA处理1h。详情见Feraru等，BEX5/RabA1b Regulates反式拟南芥-高尔基网络到质膜蛋白的转运植物营养与肥料学报，Vol. 24, no . 1, 2012
(http://www.plantcell.org/content/early/2012/07/03/tpc.112.098152)
故事
高压冷冻和冷冻替代拟南芥根尖细胞的电镜观察
徕卡EM AFS2应用说明-生命科学研究
形态学分析HPF - AFS协议:
拟南芥的根(突变体PIN1pro:PIN1-绿色荧光蛋白;bex5-1)，浸泡在20% (w/v)的牛血清白蛋白中，立即放入高压冰箱冷冻(EM协议；188金宝搏的网址徕卡微系统公司，维也纳，奥地利)。
冷冻替代是用a徕卡EM AFS2(188金宝搏的网址徕卡微系统)在含有1% ddH2O, 1% OsO4和0.5%戊二醛的干丙酮中进行4天的试验，如下:
-90°C处理24小时，2°C每小时增加15小时，-60°C处理24小时，2°C每小时增加15小时，-30°C处理24小时。样品在-30°C至0°C之间用纯丙酮洗涤3次，慢慢升温至4°C，在4°C逐步渗入Spurr树脂3天以上，包埋在胶囊中。聚合反应时间为
70°C, 16小时。
使用超微切片机(徕卡EM UC6)和后染色在一个徕卡EM AC20在20°C的醋酸铀酰中浸泡40分钟，在20°C的柠檬酸铅中浸泡10分钟。用JEM 1010透射电子显微镜(JEOL，东京，日本)在80千伏下观察网格，使用德国迪塔比斯公司(Pforzheim，德国)的图像板技术。
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