研究源自诱导多能干细胞（IPSC）的自然杀伤（NK）细胞

所谓的“天然杀伤”（NK）细胞，也称为大粒状淋巴细胞（LGL），在免疫系统中起重要作用[1,2]．它们可以迅速摧毁病毒感染、恶性或应激细胞，确保快速和特定的防御反应。对NK细胞作为一种治疗手段来缓解疾病，如免疫缺陷、细胞成熟受损和慢性疼痛等的研究，导致了对NK细胞分化和迁移的接触依赖机制的研究188金宝搏的网址［3]．这些研究通常涉及多维成像技术，包括宽视场荧光、共聚焦和超分辨显微镜。

NK细胞可以从诱导多能干细胞(iPSC)中获得。这些来自皮肤或血细胞的诱导多能干细胞可以被重新编程成胚胎样的多能状态，可以用来提供任何类型的细胞用于治疗目的［4］．最近，由于它们的重要优势，使用IPSC衍生的NK细胞的研究数量增加，例如从无障碍源的简单生成，在扩展期间保持多能性，以及长期存储能力[3,5]．当培养IPSC时，它们通常会形成厚厚的层或“圆顶”。随后，荧光标记可用于鉴定细胞内的特异性蛋白质，以及鉴定和跟踪细胞。

为了研究较厚的细胞层，有一种显微镜是实用的，它允许快速筛选大面积的标本，但也使更高的放大成像，在它内部的点有很好的对比度。基于摄像头的荧光显微镜提供易于使用，速度和检测灵敏度。然而，多层培养活细胞的研究还面临着几个重要的挑战。成像的厚标本往往导致典型的“雾”出现在图像中，这显著降低了对比度。这种雾霾是由检测到的荧光信号产生的，这些荧光信号是从样品中的失焦平面发出的。用广角显微镜观察厚标本的深处也有困难。另外，浸没在水介质中的样品可能会出现折射率不匹配的现象。

雷电成像仪3D细胞培养物配备有长工作距离消水物物镜（FL计划，25倍，0.95A）用于在厚细胞层内部图像。使用水浸泡物镜有助于校正在细胞和培养它们的水性介质的折射率之间的不匹配。另外，长时间的工作距离使得能够尖锐的聚焦在细胞层内部。要清除图像，特别是对焦点信息外，大量计算清算（LVCC），由Leica Microsystems开发的光学数字方法188金宝搏的网址［6］，在收购期间申请。另外，将背景底屑和自适应解卷积应用于用于3D图像重建的Z堆叠，使得可以以更高的对比度和更清晰的细节观察亚细胞结构［6］．

结果表明，使用THUNDER Imager 3D细胞培养和大体积计算清除(LVCC)，可以获得相对较厚的诱导多能干细胞(iPSC)层，图像没有失去焦点的模糊或雾霾和散射光。［6］．背景差和自适应反褶积的应用［6］通过用于3D图像重建的z堆栈，可以以更高的对比度和更清晰的细节观察iPSC细胞，显示荧光标记的粘附和跨膜蛋白，以及细胞核中的染色质。