LMD的标本制备使用冷冻刀
激光显微解剖的标本准备比普通显微镜要复杂一些:组织的内容物需要保护以免降解和改变。此外，使用的固定剂和染色剂不应影响或影响下游分析。因此新鲜冷冻组织是RNA下游分析的首选:新鲜材料提供了最高的起始质量和特殊的固定方案。染色程序将保持这种高RNA质量在整个上游过程和紫外激光显微切割过程对RNA质量没有影响也
图1、2:徕卡微系统公司产品经理福尔克·施劳德拉夫博士(中、左)解释了如何使用徕卡冷冻机对新鲜冷冻组织进188金宝搏的网址行激光显微切割样品制备。
LMD的染色体扩散制备
除了用于RNA下游分析的组织制备和解剖外，还需要进行DNA分析(例如突变检测)。由于单个细胞通常包含两对染色体，因此分离单个染色体对于染色体特异性疾病以及理解不同物种的基因结构和基因贡献尤为重要。
与徕卡LMD系统而150x干靶结合POL框架载玻片，分离个体染色体非常容易。步骤1:准备POL帧载玻片上的染色体扩散。徕卡LMD规程指南提供了从人类血液中提取白细胞的样本制备规程(由荷兰内梅亨大学病学系Henry Dijkman博士提供)。188bet怎么注册
激光显微解剖染色体扩散准备的步骤:
- 细胞培养72至96小时。
- 秋水仙处理培养1小时。
- 用低渗溶液培养10-12分钟。
- 在甲醇/乙酸(3 + 1,v/v)中清洗步骤和细胞固定。
- 将固定细胞滴在POL FrameSlide上，隔夜晾干。
- 姬姆沙染色液3分钟。
- 在水里再洗一个步骤后，载玻片风干。
- 徕卡上安装了幻灯片LMD系统和低放大的标本概述创建了更容易的识别扩散。
- 150x物镜用于一个详细的可视化扩展。
- 清除感兴趣的染色体周围区域(移动+剪切或绘制+扫描模式)。
- 为感兴趣的染色体选择一个采集装置，并使用合适的激光设置进行解剖。
这段短视频展示了一个新的LMD根据徕卡专家的指导，练习如何解剖染色体的用户:
这项棘手的工作始于单个染色体的收集，因为分析和扩增这么少的材料并不容易。然而，像Qiagen repi - g这样的商业套件可以帮助应对这一挑战。福尔克说:“正如这次实验证明的那样，收集染色体本身是可行的，而且很容易学习。”“除了与徕卡合作LMD系统是有趣的，因为它提供了比看幻灯片更多的东西。”
徕卡LMD系统是连接显微镜和分子生物学的纽带。“一旦您找到了系统的正确设置，您就可以开始了，”Falk解释道。“值得花时间为你的样本找到最好的设置，因为你可以很容易地存储和恢复这些设置，使你的生活更容易，并为更多的成功节省宝贵的时间!”
