本课程中的主要课题是如何在神经科学中应用激光微生物。徕卡专家演示了为什么激光微粉是脑调查的合适技术，因为它允许分离不同的脑层或甚至孤立个体神经元。
在简要介绍激光微粉世界之后，其各种选项，不同的应用，提示和技巧，与会者有机会自己运营系统。此外，Leica Micr188金宝搏的网址osystems还提供了不同样品制备技术的培训。
每位参与的科学家都有机会测试和验证整个工作流程从本地样品到廉价的标准PCR管中感兴趣的所需纯靶细胞。
图2：用Leica LMD7000系统，鼠中脑部分，未染色，60μm，在（左）和（右）分离以后（右）的标本概述。
除了对不同样品制备技术的培训外，一些科学家带来了自己的样品进行解剖。一项任务是从未染色的小脑大脑中收集整个真实性的NIGRA（图2）。
“在评估其他一些系统之后，参与者对此的力量感到惊讶徕卡LMD系统“Falk说。”我们的激光允许通过单一切割，通过收集覆盖多个视野的大面积的速度和选择来将70μm未染色的部分解剖。以这种方式，可以在很短的时间内从所有提供的样品中收集所需的脑面积。这种大型激光微小的未染色和明确的脑层的区域是蛋白质组学和代谢组学的完美原料。“
第二项任务是对单个细胞进行分析 - 而不是收集整个大脑面积，例如大脑面积，例如海马层或更小的区域。两个任务，大区域和单个细胞都可以轻松完成徕卡LMD系统通过标记目标或直接将其与激光解剖。两种方法都有其与本集团商定的优势。
标记材料允许校正，显示标记的目标区域大小，如μm²的标记目标大小，并将目标委托到一个或不同的收集器中。“解剖生活，没有必要绘制一条线 - 这是一个独特的徕卡LMD系统- 非常快速，也是娱乐的，“艺术品说。
通过重新剖析具有挑战性的组织部件或恢复不完全解剖区域，可以将实时施加移动+切割与图纸相结合。
图3：单个细胞收集示例。左：单个神经元标记为解剖。中心：解剖神经元（两者：63x目的，小鼠脑部10μm，用酸甲基染色）相同的区域。右：七个收集的细胞可以在收集帽中快速可视化，具有4倍的目标。
解剖目标细胞，独立于载玻片上的尺寸，形状，量和分布无关的靶细胞，单个细胞或较大区域的快速且易于学习的方法强调了柔韧性徕卡LMD系统对于各种应用。在研讨会之后，所有参与者都能够在几分钟内为其个人任务运营系统，并感到舒适地收集目标。
除了用于激光微粉的手动过程旁边，介绍了Leica AVC模块（图案识别）。该模块有助于加快该过程来收集各个单元格，并且需要最少与系统的交互。
在样品制备过程中，制备鼠标的几个器官用于解剖。这些样品需要特殊方案，以保留没有负面影响的分子含量，因为它们将在激光微粉后进行研究。
关于鼠脑部的固定和酸甲酚染色的协议步骤[1]：
- 确保干净（例如，无RNA酶）和无菌工作条件。
- 将低温恒温器冷却至-35°C。
- 新鲜的大脑新鲜，以防需要修剪它。
- 将大脑放在低温恒温器的保持装置上10月。
- 在-35°C的低温恒温器中平衡大脑1小时。
- 在-19℃下平衡大脑45分钟。
- 调整低温恒温器以施加合适的切口。
- 切割大脑（50μm部分）以在感兴趣区域附近实现平原表面。
- 在10μm下切割一些部分（如果切片卷，再次降低温度并再次平衡15分钟，如果截断，则增加温度并再次平衡15分钟）
- 准备一个或多个平面用于安装（如果需要，请使用刷子拉伸部分）。
- 使用膜滑块从室温下，并小心地将膜侧放在冷冻部分的顶部（截面将熔化到膜）。
- 将载玻片用安装的部分将载玻片放入50ml猎鹰管中，在-20℃下，2分钟，应制备75％EtOH并在-20℃下储存过夜）。
- 将载玻片浸入50ml猎鹰中，在75％EtOH中为1％冠氨酸紫罗兰1分钟
- 将（CA. 4秒4秒）将载玻片进入升中的EtOH排：75％EtOH，90％EtOH和FinnAly 100％EtOH，将其留在100％以上30-60秒。
- 将载体在锥形中的50毫升猎鹰管中的载玻片搅拌至少20分钟。
虽然该程序是简单的，但其他类型的组织如植物可以更棘手或更容易辨别。这将是下一篇文章的主题。
