具有单细胞精度的RNA分析工作流
徕卡的激光显微解剖系统将通过精确切割你感兴趣的细胞来改善你的工作流程。一切在目视控制下没有被周围组织污染。
RNA分析工作流程-步骤
1.样品制备
通常,特殊的膜基载玻片用于激光显微解剖。样品准备LMD是直接的,可以从经典的组织学准备中得到。
石蜡包埋使组织样本形成一种可以被切成薄片的结构。或者,你可以利用冷冻切片来准备幻灯片。用于RNA分析的组织通常是快速冷冻的,例如在液氮中冷冻,然后进行冷冻切片。
我们会把合适的LMD幻灯片为您的应用程序。
2.固定和染色
甲酚紫染色常用于神经组织染色。它是一种基本染色剂,可结合神经元细胞质的酸性分子,如富含rna的核糖体。
甲酚紫可永久染色切片,适用于石蜡切片和冷冻切片以及随后的RNA制备。
除甲酚紫外,还可使用甲苯胺蓝。
3.可视化和ROI
徕卡LMD系统可以为您生成一个自动的示例概述,可以用来轻松地导航到您感兴趣的区域(ROI)。
你的ROI,例如多巴胺能神经元,可以被AVC软件模块自动识别和标记,或者你可以手动应用形状。
4.激光显微解剖
接下来,在视觉控制下,激光对定义的roi进行精确解剖,并通过重力直接采集。188金宝搏的网址免接触切除有助于防止污染,例如与核糖核酸。此外,你可以直接切割你的样品与“移动和切割”工具,没有任何预定义的形状。通过重力收集允许使用标准的,划算的耗材如PCR管或8条管帽。收集可以直接进入裂解缓冲液或干燥。我们提供适当的LMD系统根据您的需要。
5.提取的RNA
188金宝搏的网址徕卡微系统推荐高质量的QIAGEN试剂盒(RNeasy®Micro Kit)用于核酸的制备。
它们可立即用于下游应用,如PCR、测序、定量、实时PCR,或可在-20°C下保存,直到需要时。
请参考www.qiagen.com获取详细信息。
6.RNA分析
RNA分析通常是通过qPCR进行的。特殊的LMD协议将确保RNA质量仍岿然不动。
微阵列或下一代测序(NGS)等技术也适用。
多亏了LMD切割精度你只会得到你感兴趣的细胞的结果。这使您能够可靠地比较不同组织区域的基因表达结果。
典型研究领域
- 阿尔茨海默病
- 发育生物学
- 老化
- 肿瘤组织突变分析
- 其他疾病
进一步的信息
- 激光显微解剖flyer - RNA分析(pdf)
- 激光显微解剖应用视频
- 协议-用于RNA纯化的单细胞激光显微解剖
- 激光显微解剖文章和教程在科学实验室
- 徕卡激光显微解剖(LMD)
参考文献
- 杜达等。激光捕获显微解剖(2018)pp 335-360
- 李等人。CellRep (2017)
- 绿色等。PNAS (2017)
- Ortner et al。NerobioDis (2017)