故事

如何用激光显微解剖提高你的老年痴呆症蛋白分析

收集纯净的起始物质用于蛋白质分析

许多脑病由蛋白质发生故障,错误折叠和凝集产生。出于这些原因,蛋白质分析是了解对诸如阿尔茨海默病等许多脑缺陷的原因和发现疗法的关键。徕卡LMD系统帮助您在目视控制下,轻松地从您的样品中获得纯净充足的样品数量。只需识别您感兴趣的区域,并直接切割区域与引导激光束下游分析。这些区域可以是不同的大脑区域、单细胞甚至亚细胞结构。你也可以像图中所示的那样解剖阿尔茨海默氏症的斑块,并通过质谱分析它们。

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自动斑块识别和切除的阿尔茨海默蛋白分析工作流程

Leica的激光微生物切除系统将通过自动识别和解剖您的ROI来改善您的工作流程。

这为蛋白质组学提供了充足而纯净的起始材料。一切都在目视控制下,没有被周围组织污染。

1.样品制备

通常,激光显微解剖使用特殊的膜载玻片。样品准备LMD.是简单的,并且可以从经典制剂源自组织学。

对于下游的蛋白质组学,我们推荐PET膜载玻片(几乎没有软化剂)或导演™载玻片允许完全无膜消融。

石蜡包埋使组织样本形成可切成薄片的组织。或者,你可以利用冷冻切片来准备你的幻灯片。

我们会送合适的LMD.幻灯片。

2.固定和染色

淀粉样斑块可以通过基于β-淀粉样抗体的DAB染色来观察。在明视野显微镜下可见棕色的淀粉样斑块(右)。DAB也可以与甲酚紫染色结合使用。

替代方案是刚果红色,染色淀粉样蛋白在福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)以及冷冻组织切片上。

β-淀粉样抗体也可用于免疫荧光显微镜,这也适用于徕卡LMD.系统。

3.可视化和ROI

徕卡LMD.系统可以生成一个自动的示例概述,可用于轻松导航到感兴趣的区域(ROI)。

您的ROI可以通过ADM软件模块自动识别并标记,或者您可以手动应用形状。

4.激光显微解剖

接下来,定义好的roi在视觉控制下被激光精确地解剖,并通过重力直接收集。

通过点击几下鼠标,隔离受疾病影响的材料或任何其他ROI,如果需要,将尽可能多的材料集中在一个或不同的反应容器中。

此外,您可以使用“移动和切割”工具直接剪切您的样品,而没有任何预定义的形状。

通过重力收集允许使用标准,性价比高消耗品如PCR管或8条带状管。

5.提取的蛋白质

蛋白质可以提取和制备的下游分析从解剖与建立的协议。这可能取决于上游样品的包埋方法,以及目标蛋白分析技术。

请在这里找到一些例子:

6.蛋白表达分析

以下蛋白质分析技术已成功地与蛋白质获得LMD.

  • 质/女士
  • ESI-MS / MS
  • sds - page
  • 西方墨点法
  • 2 d-dige
  • MALDI-TOF
  • SELDI-TOF
  • 核磁共振

典型的研究领域

  • 淀粉样症状
  • 癌症
  • 其他疾病
  • 药物发现
  • 植物的研究

参考

  1. 德拉蒙德等。激光捕获显微解剖(2018)pp 319-334
  2. Hondius et al。激光捕获显微解剖(2018)pp 371-383
  3. 卡希尔等。RapComMS (2018)
  4. 德拉蒙德等。ActaNeuropathol 2017

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