自动斑块识别和切除的阿尔茨海默蛋白分析工作流程
Leica的激光微生物切除系统将通过自动识别和解剖您的ROI来改善您的工作流程。
这为蛋白质组学提供了充足而纯净的起始材料。一切都在目视控制下,没有被周围组织污染。
1.样品制备
通常,激光显微解剖使用特殊的膜载玻片。样品准备LMD.是简单的,并且可以从经典制剂源自组织学。
对于下游的蛋白质组学,我们推荐PET膜载玻片(几乎没有软化剂)或导演™载玻片允许完全无膜消融。
石蜡包埋使组织样本形成可切成薄片的组织。或者,你可以利用冷冻切片来准备你的幻灯片。
我们会送合适的LMD.幻灯片。
2.固定和染色
淀粉样斑块可以通过基于β-淀粉样抗体的DAB染色来观察。在明视野显微镜下可见棕色的淀粉样斑块(右)。DAB也可以与甲酚紫染色结合使用。
替代方案是刚果红色,染色淀粉样蛋白在福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)以及冷冻组织切片上。
β-淀粉样抗体也可用于免疫荧光显微镜,这也适用于徕卡LMD.系统。
3.可视化和ROI
徕卡LMD.系统可以生成一个自动的示例概述,可用于轻松导航到感兴趣的区域(ROI)。
您的ROI可以通过ADM软件模块自动识别并标记,或者您可以手动应用形状。
- 更多关于徕卡LMD系统的信息
- 激光显微解剖文章和教程
4.激光显微解剖
接下来,定义好的roi在视觉控制下被激光精确地解剖,并通过重力直接收集。
通过点击几下鼠标,隔离受疾病影响的材料或任何其他ROI,如果需要,将尽可能多的材料集中在一个或不同的反应容器中。
此外,您可以使用“移动和切割”工具直接剪切您的样品,而没有任何预定义的形状。
通过重力收集允许使用标准,性价比高消耗品如PCR管或8条带状管。
5.提取的蛋白质
6.蛋白表达分析
以下蛋白质分析技术已成功地与蛋白质获得LMD.:
- 质/女士
- ESI-MS / MS
- sds - page
- 西方墨点法
- 2 d-dige
- MALDI-TOF
- SELDI-TOF
- 核磁共振
典型的研究领域
- 淀粉样症状
- 癌症
- 其他疾病
- 药物发现
- 植物的研究
进一步的信息
参考
- 德拉蒙德等。激光捕获显微解剖(2018)pp 319-334
- Hondius et al。激光捕获显微解剖(2018)pp 371-383
- 卡希尔等。RapComMS (2018)
- 德拉蒙德等。ActaNeuropathol 2017