故事

FCS - 荧光相关光谱

FCS方法

FCS.是一种基于荧光的测量方法。通过强烈聚焦的荧光分子,对荧光发射激发了荧光分子。在通过共聚焦针孔之后,使用非常敏感的探测器登记发射的光子。

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源自自相关曲线的定量参数

移动颗粒产生强度波动。其自相关的揭示了分子尺度的信息:相关曲线的幅度显示粒子数。拐点处的时间包含有关颗粒移动性的信息。最后,曲线的陡度和形状反映了扩散的类型。颗粒浓度,颗粒质量,粘度和结合级分可以衍生自这些参数。

FCS数据采集与分析的原则

  1. 在一个兴趣点(梁停放)在激发体积中激发荧光颗粒的激光照射。共聚焦体积的颗粒运动导致强度波动。
  2. 使用单光子计数模式中的检测器注册强度波动。
  3. 相关函数的计算。
  4. 将相应的生物物理模型拟合到相关曲线。获得感兴趣的参数:

    • 颗粒浓度
    • 扩散系数
    • 粘度
    • 分子量
    • 绑定常数
    • 照片物理属性

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