跟踪分子与FLIM-FRET的相互作用

现代研究研究分子如何相互作用以完成重要任务。FLIM-FRET是探索这些相互作用的黄金标准。

STELLARIS 8 FALCON为FLIM仪器设定了新的速度标准。

它在高度动态的细胞事件中启用FRET。您可以在日常实验中获取和解释FRET数据。

笼cAMP在表达EPAC mT2-dVenus FRET传感器的HeLa细胞中。EPAC对uv介导的cAMP脱脱的反应(中心区)。以4帧/秒的速度录制的电影。图像大小:256x256像素。色条刻度(生命周期):ns。Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam。

凝血酶激活肽刺激后的钙振荡。单个细胞的反应被记录为生命周期的变化。电影以4帧像素拍摄。图像大小:256 x 256像素。色条刻度(生命周期):ns。Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam。

用生物传感器监测细微和快速的变化

生物传感器是代谢活性、信号机制、pH值和微环境变化的强大报告器。

STELLARIS 8 FALCON提供了荧光寿命中包含的信息,即使是超快事件,如膜电位动力学。该信息补充了光谱荧光强度成像和TauSense模式交付星8系统

更可靠和灵敏的代谢成像

在常规成像中,自体荧光可能是一个问题。stararis 8 FALCON将其转化为有价值的信息。您现在可以将自身荧光转化为代谢状态、细胞分化和癌症发展的报告器。

此外,STELLARIS 8 FALCON能够在活体组织中成像对比,在活体组织中,荧光标记通常不特异或破坏生理条件。

哺乳动物细胞在非生理条件(pH 8.5)下的自身荧光。该信号与NAD/NADH内源性池的变化相关。氧化应激的发展表现为荧光寿命随时间的减少。原始图像大小:512 x 512像素。色条刻度(生命周期):ns。
强度
这部电影

荧光团分离超出光谱选项

荧光标记是区分细胞内结构的标准方法。光谱分离非常强大,但当发射光谱太接近时,有时会受到限制。

使用STELLARIS 8 FALCON,您可以利用荧光寿命成像的全部潜力,使用指数拟合、模式拟合和新的FLIM相量分离分析分离多个荧光探针。

交互式图像:细胞骨架结构通过生命周期对比区分。Vimentin用Alexa Fluor 555免疫标记(绿色),tubulin用Alexa Fluor 546免疫标记(蓝色)。荧光团在光谱上非常相似,但利用荧光寿命信息将它们分离。图像大小:512 x 512像素。

STELLARIS 8 FALCON用于快速生命周期成像

STELLARIS 8 FALCON显微镜克服了FLIM的速度限制,开启了快速寿命数据的大门。

到目前为止,由于FLIM技术的限制,从快速过程的荧光寿命数据中提取功能信息很难。FLIM采集速度比记录共焦强度至少慢10倍。

使用STELLARIS 8 FALCON快速生命周期对比成像,您可以以适当的速度跟踪细胞中的动态过程。这些任务的实现要归功于一种新的时间测量方法,使用TCSPC(时间相关单光子计数)以及用于数据处理和分析的智能算法。

Nature上的应用说明:SP8 FALCON:荧光寿命成像的新概念,支持视频速率共焦FLIM

荧光珠(洋红色)在含有Alexa Fluor 555(绿色)的溶液中的单通道图像。基于荧光寿命的荧光团分离可以在不同的速度下实现,例如16帧/秒(上),27帧/秒(视频速率,中)和83帧/秒(超快,下)。使用寿命信息进行染料分离明显优于强度(灰度)。影片显示了生命周期组件的逐像素拟合。帧大小:512 x 64像素。比例尺:10µm。

简单的复杂样本采集。包含190万像素的722个贴图的高分辨率小鼠胚胎马赛克图像。FLIM数据拟合四种特征荧光寿命,颜色编码。采集:1:23小时。分析:1:00小时

一体化多模态成像

将FLIM与其他模式相结合从来不像STELLARIS 8 FALCON那样容易。到目前为止,研究人员不得不处理复杂的布线和繁琐的文件传输任务。使用STELLARIS 8 FALCON,您可以将生命周期信息集成到标准共焦工作流程中。

STELLARIS 8 FALCON完全集成在LAS X采集和分析软件中。它可以在4个光谱通道中同时记录FLIM,最多可连续记录10个通道。STELLARIS 8 FALCON为您提供3d堆栈、延时序列、甚至大型马赛克瓷砖格式的终身对比度。

有了LAS X NAVIGATOR,您可以将您的观察区域扩大到10,000倍,在确定您感兴趣的区域和以全新的方式探索您的样本方面节省了宝贵的时间。

用相量直接定义生命周期

分析STELLARIS 8 FALCON使用FLIM相器提供生命周期组件的2D可视化。利用FLIM相量器,您可以跟踪微环境的变化,选择组件复用信号和确定FRET效率。

带有Alexa555-Phalloidin和H2B mCherry标记的细胞。使用FLIM相量进行分离。相量图清楚地显示了两种分布。马丁博士Stöckl,德国康斯坦茨大学生物系。
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LAS X软件使FLIM通过点击和与常规光谱成像相同的原理。

即使你使用显微镜作为辅助技术,你也可以找到必要的东西并立即开始成像。

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