通过结合共聚焦和光片显微镜发现新的应用
数字光片显微镜STELLARIS DLS
188金宝搏的网址徕卡微系统独特的设计方法允许您在一个系统中执行共焦和光片成像,提供温和的,单平面照明。我们的数字光板系统(DLS)的垂直设计使得它可以作为一个升级集成到STELLARIS 5和STELLARIS 8系统中。这样,您就可以从全共焦和易于使用的光片显微镜中受益,使您的研究更加多才多艺。
图片:一个4天大的斑马鱼胚胎的缝合图像,带有标记的内皮细胞。图片由Elvire Guiot博士提供,IGBMC成像中心,伊尔基尔奇-格拉夫登,法国。
为你的研究增加多功能性
用DLS补充您的STELLARIS 5或STELLARIS 8系统使您的研究更加多才多艺,使您能够通过直接的样品处理和多位置实验在三维中轻松地成像不同类型的样品。
DLS模块旨在改善您的活细胞成像应用程序,增加细胞活力,这得益于单平面照明和sCMOS相机的快速成像。除了活标本,DLS还允许图像清除的样本,提供更大的灵活性,以达到您的研究目标。
垂直转向-光片是如何产生共焦的?
光片显微镜通常需要在独立的系统上安装专用的光学装置,其中照明物镜和检测物镜彼此垂直。DLS使光片显微镜易于访问。独特的TwinFlect反射镜装置将照明的光片偏转90°角。这种改进可以将照明和检测光束路径集成到每个带有倒置显微镜支架的STELLARIS系统的垂直轴上。所有这些增强都不会影响共焦功能。
低光毒性和三维标本成像:黑腹果蝇的发育超过6小时。调查:光敏RFP。3 d渲染。150 μ m z堆叠,30sec/堆叠。
进行并记录长期观察
成像需要光线,但过多的光线会损害细胞。光片显微镜是迄今为止最温和的成像方法,因为它减少了光毒性和漂白的整体光损伤。这会自动增加你的标本的生存能力。发育生物学尤其受益于光片成像。低光照和高速采集相结合,可以让你在很长一段时间内跟踪敏感的、发育中的生物,比如果蝇胚胎,并实时和3D地了解组织和器官是如何形成的。
光片成像原理
光片显微镜是一种非常适合的成像敏感样品或快速生物过程的方法,只在一个平面上照亮标本。
由于没有失焦激发,光毒效应可以减少到焦平面。此外,通过移动样品通过光片,你可以自动光学切片,并可以在三维标本成像。
高速成像:跳动的斑马鱼心脏,转基因系flik1::EGFP。采集后对准xytz记录后。记录速度:120帧/秒。由Emily Steed提供,Vermot实验室,法国斯特拉斯堡IGBMC。
快速图像采集,分辨率高
如果没有合适的图像速度和分辨率,在长时间内用3D观察快速和周期性的生物过程,比如斑马鱼心脏的跳动,可能会具有挑战性。有了DLS模块,您可以在两个先进的sCMOS相机之间进行选择,快速图像采集具有出色的分辨率,两者都完全集成到LAS X LightSheet Wizard中。
乳腺上皮微球三维培养7.5 h延时记录。数据由智能成像组提供(B. Eismann/C.)康拉德)在BioQuant/DKFZ海德堡
探索3D细胞培养,一次多个位置
三维细胞培养的有效成像,如类器官或球状体,由于它们的体积大,提出了一系列新的挑战。类器官可以固定,免疫标记,并使用清除技术进行研究,但也可以利用活体研究动态过程。由于有明确的工作流程,用DLS研究这些样本很简单,并提供了有关细胞和分子过程的有意义的信息。DLS非常适合解决清除和活性制剂的需求,使您可以研究3D细胞培养,与贴壁细胞上的2D细胞培养相比,3D细胞培养提供了更相关的生理条件。
发现完整的3D细胞生物学工作流程数码光片显微镜。
活样和清样的光片系统
由于生物组织的不透明,深层组织显微镜检查很困难。这就是越来越多的组织清除协议发挥作用的地方,但它们可能是许多成像系统的一个挑战。
DLS模块不仅可以对实时样本提供出色的结果,还可以对经历了各种不同的清除技术的样本进行成像。使用DLS,您可以在几个检测目标和安装框架之间进行选择,允许在清除的组织和生物体中可视化结构细节。
视频采集条件:
- 检测目标HC APO L10x/0.30 W DLS
- 图像尺寸:1.39mm x 2.04mm (2x3平铺)
- Z堆叠:1.5mm厚度(2um步长,745帧)
- 采集时间:5分37秒
- 激励:514海里
- 发射:LP514nm长通,6 msec曝光时间
用SeeDB2G清除成年Thy1-YFP-H小鼠大脑切片的大脑皮层和海马。图片由Ke Meng-Tsen博士和Takeshi Imai博士提供,日本神户理研中心。
该实例说明了共焦与DLS相结合的优点。转基因斑马鱼胚胎被标记为参与免疫反应的巨噬细胞。为了研究他们受伤时的行为,共聚焦激光被用来制造一个伤口(箭头),之后,一个延时电影被记录下来。视频显示了被激活细胞的动态反应,这些细胞现在迁移到伤口,触发了愈合过程。在这种情况下,切换到DLS可以对斑马鱼进行温和的活细胞成像。
受益于许多额外的应用程序
我们的光片模块不仅仅是您共焦功能的附加组件。STELLARIS和DLS协同工作,为您的研究提供更多的选择。例如,你可以使用共聚焦技术操纵你的标本,然后用DLS成像。
只需在LAS X软件中的共焦和光片模式之间切换即可。这样,光转换或损伤实验与后续温和的长期观察变得容易和方便。
熟悉样品制备
由于DLS的垂直实验设置,您可以保持熟悉的样品制备。标本安装在传统的玻璃底培养皿中,可以直接接触。你甚至有可能在多定位实验中筛选几个样品。利用共焦阶段自动化,多个标本可以在一个实验装置成像。唯一的先决条件是什么?示例的每一侧都有一些空间用于TwinFlect镜像。
具有共焦优点的光片
得益于DLS的无缝集成,您的光片成像受益于您的STELLARIS系统的技术创新。
总是正确的激光
你的星之星共聚焦的所有可见激光器都已准备好用于光片成像。可选的二极管激光线以及STELLARIS下一代白光激光器为您的光片实验选择正确的染料具有很高的灵活性。有了STELLARIS 8,你现在甚至可以解锁近红外染料的成像。
总是正确的扫描器
在配备串联扫描器的STELLARIS系统上,您可以选择共振扫描器或视场扫描器(1400Hz)来生成扫描的光片。用共振扫描仪生成的光片产生更短的像素停留时间,这有利于执行更温和的成像。
Workflow-oriented软件设计
LAS X软件通过数据记录和评估,逐级引导用户。以工作流程为导向的设计帮助您更有效地使用仪器。一种方便的校准程序精确地建立了光片。
样品的双面照明是经过设计的:TwinFlect的两个相对的镜子都可以被扫描器瞄准以克服较暗的区域。对于具有大视场的清晰图像,您可以使用LAS X软件中的LightSheet Wizard的在线或离线融合选项来合并这两个图像。
使用额外的软件包来定制LAS X以满足您的需求。LAS X 3D可视化模块通过直观的剪切、快速渲染和立体显示提供了与3D数据交互的新颖方法。瓦片扫描实验使您能够观察大范围。Mark & Find实验允许你在多位置设置中观察几个感兴趣的区域。
优越的光学
优越的目标,广泛的应用是徕卡微系统的标志之一。188金宝搏的网址我们的系统的核心是将光片垂直旋转,它是由物镜和TwinFlect反射镜装置组成的。
通过选择不同的照明目标,您可以根据您的实验要求来塑造光片。
为了显示最好的细节,有更大的视野,或适应成像介质的折射率,您可以从越来越多的选项中选择最佳的探测目标。
客观的 | 活细胞成像 | 糖基清除试剂 | BAAB清算兼容 |
氟唑L 25x/0.95 W | 是的 | 没有 | 没有 |
APO L 20x/0.5 W | 是的 | 没有 | 没有 |
氟唑L 16x/0.6 IMM | 是的 | 是的 | 是的 |
APO L 10 x / 0.3 | 是的 | 是的 | 没有 |
5 x / 0.15 IMM | 是的 | 是的 | 是的 |
方便数据处理
用3D和长时间观察过程可以生成大量数据。在LAS X软件中实现的一些工具可以帮助您方便地管理数据。在线融合工具为您提供了保留原始数据或仅通过保存合并图像来获得磁盘空间的选择。您的数据将在采集过程中自动存储。智能加载方便了数据审查,使您可以直接访问大型延时数据集中感兴趣的时间点或z堆栈。您可以在自动处理的管道中编译所需的后处理步骤。
最佳的环境条件
软件控制的气候室保持您的标本最喜欢的环境条件。使用LAS X环境控制模块,用户可以完全控制实验条件。实验过程中可以对记录的环境数据进行监测。所有的环境条件都可以在一个接口内设置,例如,您可以运行热冲击实验的温度剖面。
选择环境室或阶段顶部培养溶液。
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和我们的专家谈谈。我们很高兴回答您的所有问题和关切。
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