使用旋转装置安装DLS样品

对于图像采集，标本制备有两个主要要求。样品需要放置在检测物镜的焦平面上，在盖子的两面镜子之间。另外，需要从培养皿底部稍微抬高，以便镜子/光片到达样品的远端。

一个方便的方法来定位样品在样品空间的自由区域(见上图)是使用FEP(氟化乙烯丙烯)管(见下图)。由于折射率n为1.338,FEP非常适合于浸没在水溶液中的样品成像(至少当使用中等数值孔径的物镜时[NAs])。

对于SP8DLS成像时，可以使用FEP管定位和固定标本(见下图)。

这种试件安装的优点有:

• 简单的处理和
• 可以使用低浓度的支架介质(如琼脂糖或甲基纤维素)，在长期的生理条件下提供足够的标本限制在活的有机体内成像。

缺点是很难对齐标本，使感兴趣的区域暴露在用于荧光检测的一侧。

为了克服这一缺点，在保持上述优点的同时，设计了一种旋转装置，使FEP管的角度易于调整，从而使标本可以最佳地对齐成像。这种设置以前在其他地方也有过展示(1、2、3)．

样品旋转装置(见上图，158007064)DLS成像有:

• 的DLS旋转设备;
• 显微镜玻璃盖片(21 x 26毫米);和
• FEP管(Camitec，外径2.00 mm，内径1.80 mm)。

然而，旋转装置中没有硅胶或其他材料用于密封盖滑移。

步骤一:清洗FEP管(推荐程序)

正如考夫曼在报告中所描述的et al。［4］， FEP管在使用前应按下列方法处理:

• 首先，所有的溶液必须进行脱气和注射器过滤(millux - hv, PVDF, 0.45µm);
• 用1m NaOH(默克)冲洗;
• 置于0.5 M NaOH中超声10分钟;
• 用双重蒸馏的H₂O和70%乙醇
• 超声在70%乙醇中浸泡10分钟;
• 用双重蒸馏的H₂O;和
• 最后贮存于双馏H中₂O。

步骤二:用玻璃盖滑块密封旋转装置

将盖片密封在旋转装置上的方法如下:

• 将硅胶涂抹在旋转装置底部凹槽内侧边缘(见下面A);
• 添加一个盖玻璃，轻轻按压玻璃，以确保它均匀地放置在所有点上，以保持良好的密封(见下面B);和
• 要检查室密封，向旋转装置中加入一些蒸馏水，看看是否有泄漏(见下文C)。

步骤3:将标本放入FEP管中

标本放置在安装的介质中，用移液管或注射器(如下图所示)将标本拉入管中。

FEP管的长度需要为38毫米。

步骤四:将FEP管插入旋转装置

在FEP管的两侧安装黑色的盖子(见下面的A和B)。

如下所示，将带有黑色帽和磁铁的FEP管的末端插入旋转装置的引脚(1)。

最后，管子的另一侧被固定在合适的位置(下图1)。

步骤3:开始图像采集

将玻璃底培养皿放置在顶部TCSSP8DLS扫描阶段(见下文)。

注意:旋转装置只与以下z-Galvo级刀片兼容:

• 158004118旋转插入逆和
• 158004119插入通用。

小心:初始化后只将旋转装置放入z-Galvo级。另外，在改变(照明)目标时要注意。旋转装置的轮子向下突出，可能会意外地碰到一个目标(最好先从炮塔上移走笨重的目标)。

使用LightSheet向导，它包含在拉斯维加斯X软件，您现在可以获得您的标本的图像。