利用STED和可交换荧光团扩展纳米技术的可能性

利用荧光团瞬时结合到目标上的想法源自于一种被称为PAINT(纳米形貌成像的点积累)的单分子超分辨率方法(Sharonov和Hochstrasser, 2006)。［3］．涂料的一个关键优势是光漂白的独立性：荧光团反复和瞬时结合其靶，而在成像缓冲液中否则可自由扩散。

根据这一概念，作者考虑了PAINT通常使用的可交换标签，也考虑了其他成像方式，如共聚焦显微镜和stnanoscopy。这些荧光团标记的前提是目标结构的快速交换动力学和高密度标记。不同于单分子PAINT成像，这需要更高的浓度，以及合适的结合亲合力(~µM)和离结合动力学(~ 10-100 s)^-1)．作者评估了五种标签的性能，包括两种膜染色(Nile Red, FM4-64)，两种荧光DNA染色(JF646-Hoechst, sirr - hoechst)，以及肌动蛋白标记肽Lifeact-AF594。他们测定了荧光团在目标结构和自由池之间交换的能力，荧光信号随时间的变化以及结果st图像质量。重要的是，一些荧光团是细胞渗透性的(如Nile Red和SiR-Hoechst)，因此适合于活细胞实验。研究的所有染料都兼容相同的耗竭波长(775 nm)，并允许简化的两种颜色st成像：尼罗红，FM4-64和LifeaCt-Alexa 594可以容易地与其中一种DNA染料（JF646-HOECHST或SIR-DNA）。

总之，结合了st可交换荧光团为全细胞、多色和活细胞提供高标记密度st成像。可交换标签不仅有利于3D和活细胞测量，还允许优化st成像没有失去信号与永久标签。这个概念可以扩展到其他标签，并为st在相关成像方法中。