3D点传播功能（PSF）和全宽半最大（FWHM）
由光学系统创建的点（点）的图像称为“点扩展功能”（PSF）。点扩散功能描述了源于尺寸尺寸点的三维三维的分布。该衍射图案的核心具有椭圆形，并控制光学分辨率。径向尺寸规则规则横向分辨率;轴向尺寸规则缩放焦深，因此切割性能。
对于共焦切片，目标是仅传输PSF的内核，其定义光学部分。事实上，针孔直径控制了传输核心外部的光线。因此，在衍射图案的尺寸范围内的光学部分显然不会像一片面包一样锐尖，但是通过相对平坦的斜率为特征。连接强度分布两侧的50％强度的Z的距离称为“全宽半最大”（FWHM），并且通过惯例，这被用作光学部分厚度的量度。通常通过聚焦通过在Z中模拟无限薄结构的表面镜来测量光学切片性能。这种方法是（相对的）容易，用于检查共聚焦显微镜系统的性能。或者，使用含氟胶质乳胶珠（参见图1）测量Z切片性能。荧光珠允许在非相干条件下测量的性能，这对于荧光成像是真实的，因此符合生物医学科学中的绝大多数共焦应用。188bet怎么注册与荧光模式中的截面相比，反射光模式（镜子）中的衍射限制光学部分显着更薄。如果比较文献中的数字，请记住这一点非常重要。
控制光学部分厚度的参数
在理想条件下，可以达到的最薄的截面只取决于光学衍射的限制。最明显的是波长，它成比例地控制着PSF的大小:波长越短，薄片越薄。我们可以假设激发光的波长受到限制(而不是发射光的波长)，因为在被照亮的空间之外不会有发射。第二个参数是物镜的孔径(数值孔径，NA): NA越高(收集信息的角度越宽)，光学截面越薄。此外，样品的折射率影响轴向分辨率，从而影响切片性能。切片大小dz与这些参数的关系由公式图2给出。
第三参数是检测路径中的针孔直径，其假设为上述公式为零。因此，该公式给出了最佳值，可以预期荧光成像 - 当然是理论兴趣：零直径的针孔不会产生明亮的图像！
关于光学截面厚度的关键评论
数值孔径NA对切片厚度有显著的(1/平方)影响。psf的径向扩展线性依赖于NA。因此，对于低na透镜，PSF核心变得很长，切片很厚。因此，大多数应用程序使用NA > 1浸没透镜，其中xy和z尺寸的比率接近2倍。根据经验，高na镜头的z部分分辨率大约是xy的两倍。
理论考虑有助于估计光学系统的性能。实际上，仪器和样本都引入了与计算的数字的偏差。必须仔细调整仪器以获得最佳性能。而样本本身就是解决方案的敌人，特别是如果谈到更深的成像。因此，必须进行极端护理，必须采用折射率匹配，正确和恒定的温度和适当的盖玻片选择。该理论将提供一项经验法则，但样品和设置可能会引入显着的偏差 - 通常是不可避免的，因为生物样品比晶体（ - 或真空）更复杂。
参考文献
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- 细胞生物学中的光学成像技术。Taylor & Francis, Boca Raton USA(2007)。
