随着绿色荧光蛋白(绿色荧光蛋白)在20世纪90年代，活细胞成像的研究引起了极大的兴趣。再加上显微镜上更快、更灵敏的检测系统，提供了更大的机会。生命科学研究已经从这些活细胞成像研究中获得了令人难以置信的数量，很难想象没有这些工具的研究会是什么样子。
电子显微镜领域还没有完全锁定于光镜波的动量，但近年来，很明显，光镜的分辨率在某些情况下限制了科学问题的解决。因此，人们对开发结合活细胞成像方面的技术越来越感兴趣绿色荧光蛋白高分辨率新兴市场（图1）。绿色荧光蛋白不直接可见新兴市场(电子显微镜)，但可以通过抗体或光转换可视化。然而，这种方法是基于在室温下化学固定的样品。有很好的文档说明这可能会引入人工制品。这样的人工制品在LM（光学显微镜）水平由于没有固定剂（即时）或者在研究固定样品时，人工制品低于分辨率LM．
但是，在新兴市场他们变得明显，这正是我们想要在高分辨率和精确细节下学习结构的地方。存在一种基于物理固定的替代固定方法，即低温固定。它固定细胞更快，与化学固定不同是非选择性的。高压冷冻（HPF）如今是最可靠的细胞和组织的低温混合方法。将样品放在高压（2,000巴）和毫秒之后，然后用液氮喷射样品。这可以防止冰晶的形成和生长，并立即将样品固定，高达约200-300μm深度保存的玻璃样品。
高压冻结新的时间分辨率
HPF机器最初并不是为这些类型的实验而设计的，主要的限制是它需要时间来研究一个样品下LM，发现一个有趣的事件，然后将样本转移到一台HPF机器来修复它。对于一个非常有经验的用户来说，这至少需要30秒。到那时，利益结构已经消失了(图1)。
因此，L188金宝搏的网址188bet怎么注册;eica Microsystems与Paul Verkade博士（医学院，大学散步，布里斯托尔，英国）一起举行，旨在开发一种能够进行的工具克莱姆用HPF进行实验，但时间分辨率小于5秒。最终结果是徕卡新兴市场PACT2与新兴市场RTS（图2）。它是移动的，所以它可以移动到任何光显微镜。RTS代表快速转移系统。该系统由快速装载机组成，该加载器包含样品（图3）和实际传输系统作为与HPF机器的附件。在将快速装载机插入RTS后，样品被自动封闭并沿轨道射入徕卡新兴市场PACT2被冻结。此序列只需要2.4秒。这留下了足够的时间为科学家从光学显微镜下取快速装载机并将其放入RTS中。这种运动可以在1-1.5秒内很容易地完成，因此导致总时间分辨率约为4秒。现在可以将冷冻的样品用于电子显微镜。
冻结替代的新标准
在大多数情况下，这将涉及冷冻取代，即在树脂渗透和低温聚合之前，用丙酮等溶剂将冷冻水从样品中除去。徕卡微系统公司(Le188金宝搏的网址ica Microsystems)最近也推出了徕卡，让科学家的工作变得更容易新兴市场AFS2与新兴市场FSP这样就可以自动交换所有的冷冻替代化学物质。图3显示了这样一个实验的示例。将表皮生长因子(EGF)与量子点偶联。量子点具有荧光和电子密度，因此是很好的标记物克莱姆研究。EGF已内化30分钟，存在于多泡体(MVB)中。MVB作为一个动态结构出现，随着时间的推移有很多扩展出现和消失(图3c)。
当另一个扩展出现时，样品被采集并立即冻结。同样的细胞被回溯，感兴趣的结构现在可以在高分辨率下可视化，显示连接。总之，是徕卡新兴市场PACT2 +新兴市场RTS加上徕卡微系统的共聚焦显微镜188金宝搏的网址为生命科学家提供了一个很好的解决方案，既可以扩展他们的工具箱和知识。
