果蝇组织中优越的超微结构保存和结构对比

介绍

果蝇幼虫肠道是一种简单的上皮，分为三个不同的隔间，前述，中肠和后肠。送纳贝伯是位于前述内容和中肠的连接处的灯泡形器官，并用作控制食物进入中间肠的阀门的阀门。省代核的后端，有四种长的手指状突起称为胃癌，这是负责大多数消化物酶的活性分泌（1,2,3）。

程序

来自侏泳菌和胃癌的幼虫的一部分前胚幼虫在施耐德培养基中解剖，并转移到腔体深度0.2mm的腔体深度。经过多余的施耐德培养基，并立即将1μl20％BSA / PBS移液并均匀分布。在检查样品方向之后，将-B型法兰氏料放置在顶部，平坦表面下来以密封组件。

使用徕卡冷冻组装的样品室em.冰高压冻结系统。将冷冻的样品转移到液氮蒸汽中冷冻，并转移至预冷却（-90℃）冷冻替换装置（Leicaem.AFS）。使用以下程序使用0.12％乙酸乙酮中的乙酸乙酯的混合物进行冻取量：-90℃45小时，然后从-90℃至-50℃（15°C / hr）缓慢升温。在-50°C下除去冻结溶液，用丙酮洗涤样品3次10分钟。通过在丙酮中增加浓度的LociCryL HM20树脂（25％，50％，75％）的丙酮中的浓度与100％树脂持续48小时的持续48小时来进行树脂浸润。将样品从-50℃逐渐升温至24℃（5°C / HR）和紫外线聚合在48小时的时间内。超薄部分（50-60nm）在徕卡切割em.UC7 UltramicOrotome并用2％的乙酸盐水溶液瓶10分钟，柠檬酸盐2分钟。在JEOL JEM 1200 EXII上获得数字显微照片，在80kV下运行，配备底部安装的AMT XR-60数码相机。