一个简短的历史
在1893年题为“Ein Neuesbeleuchtungsverfahrenfürmürmikrophotographischezwecke”的纸上发表于Zeitschriftfürwissenschaftlichemikroskopieundfürmikroskopischetechnik，他阐述了主要问题当时的显微镜师。肥沃的气体灯和氧化锆灯是本时代可用的主要照明来源，但这些趋势具有产生不需要的“眩光”的趋势。
奥尔煤气灯以奥地利科学家和发明家命名，Baron Carl Auer von Welsbach（1858-1929）。他被认为是在欧洲各地用作街道照明的天然气地幔。虽然润肺气体灯仍然生产碳酸和一定量的热量，但伦敦气体照明和卫生供水杂志惊呼道，润孔光被“非常合适”的显微镜。
替代的氧化锆光是通过加热元件锆生产的强烈化学光源。然而，利用这种光源，Koehler宣称“难以实现或不可能实现均匀的照明”。Koehler意识到，为了照明的一致性，需要考虑每个显微镜的组分，并彼此正确地对准。通过对膜片和冷凝器进行调整，他克服过热和光效的主要问题（甚至使用歌剧玻璃代替凸透镜！）。
一个重要的原则
即使在今天，他的一贯照明技术仍然被广泛使用，并形成了许多技术的基础，包括共聚焦那相位对比和差动干扰对比（迪拜国际资本)显微镜。一旦你知道如何设置一个正确的克勒照明显微镜，它应该成为第二天性，将改变你的成像工作。这是光学显微镜最重要的原理之一。
用不到一分钟的时间就可以搭建起一个克勒照明显微镜。这将确保光源均匀地照亮你的标本，产生更清晰的图像，并将增加染色区域之间或组织区域之间的对比度。您还可以从每个样本中收集更多的成像数据。
如果您需要在PowerPoint演示文稿中使用的图像，海报演示或提交到期刊，那么Koehler照明就是必须的。这种简单的五步技术有很长的路要走，并且随着一点练习，在捕获图像之前，很容易成为第二种性质。
除了显微镜目标中，还有另外两个组件，您应该了解（并调整其调整），用于Koehler照明。
野外膜片
场隔膜的通常是位于基地(立式显微镜)的仪器作为显微镜的身体的一部分(图1)。一些老(或简单)显微镜可能只有一个“开/关”光源开关,可能没有字段隔膜来控制光的强度从源。场光圈简单地控制最终到达舞台上幻灯片的光的数量。通过控制来自光源的光量，你可以减少光源的眩光，从而得到更强的对比度。场光圈通常由透镜周围的滚花环控制。
Sub-Stage冷凝器
直接在直立显微镜（或在阶段之上但是在倒置显微镜中的光源/场隔膜的前面）中，是子级冷凝器（图1）。虽然它具有类似于显微镜的细/粗焦点的焦点轮子，但是该组件用于将光聚焦来自光源/场膜膜片，而不是将标本带入焦点。
“次级聚光器”收集光源的大部分光，并将其聚焦成一个锥形的成象光，放在显微镜台上的载玻片上。当这个冷凝器被正确地调整，照亮你的标本和进入物镜的光是完全优化的。这使得最终的图像具有均匀的强度和对比度。由于显微镜的每个物镜是不同的，这意味着当你改变放大倍数时，次级冷凝器需要调整。
在二级冷凝器内，有两个组成部分，它们被调整以设置正确的克勒照明。这些是定心螺钉和膜片。除现场膜片外，次级冷凝器还具有光控制膜片，该光控制膜片可通过滑动控制器或围绕在冷凝器周围的类似于现场膜片的滚花环进行调节。这个光圈控制着照亮标本的光锥的角度。正如我在我的文章中提到的数值孔径（NA），整个显微镜系统的NA不仅由目标决定。实际上，当开放子级冷凝器隔膜时，这产生了整个仪器的NA增加，导致更大的分辨率，对比度和最佳照明。定心螺钉确保用于照亮幻灯片的光直接位于视野的中心，从而在样本上提供均匀的强度。
koehler照明的五个步骤
步骤1:
在开始映像会话之前，始终检查镜头，目镜，目标是干净的。清洁显微镜镜片被另一个文章，但您应该始终使用镜片清洁组织和推荐的溶剂。将滑块放在舞台上，然后将灯开启到最低设置。
步骤2:
聚焦你的标本，但记住，如果你使用的是一个共享设施的仪器，那么显微镜设置可能完全不对准。
首先，在直立显微镜下关闭位于仪器底座上的场膜片，在倒置显微镜下关闭位于冷凝器上方的场膜片。当您向下看目镜时，您现在只会看到幻灯片上的一个小光圈(图2)。
第3步：
现在聚焦冷凝器。当您坐在显微镜时，冷凝器的调节轮通常只是在焦点前面。俯视目镜时，将冷凝器慢慢上下移动。你会发现光圈的边缘将进入和摆脱焦点（并且从红色边缘变为蓝色边缘）。尽可能尖锐地制作光圈的边缘（图3）。
步骤4:
一旦你有锋利的光圈，远离目镜，看看显微镜的冷凝器组件。你会看到定心螺丝。您可以将冷凝器置于隔膜关闭或几乎完全打开。我通常用现场隔膜用电容器居中，其中我在上面的步骤中离开它 - 几乎完全关闭。虽然握住螺丝，请再次俯视目镜。当你慢慢转动螺丝时，你会发现光圈会在视野中移动。您应该旨在在标本的视野中拥有圆圈（图4）。
一旦聚光器集中，打开场光阑，直到光圈的边缘从视野中消失(图5)。
第5步：
（5）最终调整与虹膜（或孔径）隔膜。位于定心螺钉（或上方在倒置显微镜上），您可以找到类似于主场隔膜的另一个隔膜。虽然俯视目镜，完全打开，然后开始关闭它，直到图像“耀斑”消失。通过关闭光圈隔膜，您将增加标本的对比，但分辨率将减少。您应该根据您的眼睛和您正在观看的标本找到平衡。
那是它 - 五个简单的步骤。
总结 - 关闭隔膜，将边缘聚焦，中心位置，打开隔膜并减少耀斑。
