TauContrast对图像复杂样本的好处

Stellaris故事:采访Timo Zimmermann博士

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在这次采访中,蒂莫·齐默尔曼博士谈到了他使用TauSense工具的经验,以及它们在研究需要的样本(如厚样本或超大胚胎)方面的潜力。作为巴塞罗那基因组调控中心(Centre for Genomic Regulation, CRG)先进光学显微镜部门的负责人,蒂莫·齐默尔曼博士于2020年在那里测试了STELLARIS 5共焦系统。

拟南芥的根 - 下胚轴结。用taucontrast获取的图像。Sample礼貌:Heidelberg大学Melanie Krebs博士。

您如何使用Stellaris 5的经验?

Timo Zimmermann博士:我使用Stellaris 5系统的经验非常积极。入门使用系统非常简单,我可以轻松地在设置实验时应用关于共聚焦成像的现有知识。我特别高兴地看到共聚焦成像现在扩展到包括基于终身信息的信息。我喜欢斯蒂拉里斯如何使用不同的Tausense Tools1来访问基于终身的信息,以前非常复杂的东西。现在,点击一个按钮,荧光寿命测量变成了你共聚焦实验的另一个附加功能,并且对我来说有这种额外对比的可能性非常有趣。

此外,由于其在模拟和光子计数模式下都能工作的新型探测器,STELLARIS似乎具有很高的光效率:用很少的能量,你就能得到很好的信号结果。

告诉我们更多关于你使用TauSense的经验。

Timo Zimmermann博士:我使用了大量的TauContrast特征,它将每个像素的平均寿命信息添加为一个单独的图像通道。因为你可以用脉冲照明作为大部分光谱的标准激发,你实际上可以通过探测器免费获得寿命信息。这很重要,因为它为每个荧光信号提供了另一个维度,实际上是荧光团的定义特征之一,以一种非常直接的方式。

我使用TauContrast主要用于相当复杂的生物样本。在这里,寿命信息增加了很多,除了不那么具体的光谱信息,所以你可以更好地区分结构。换句话说,它有助于更好地理解复杂的形态。我相信对于视觉上和结构上复杂的有很多自然信息的样本,不仅仅是你添加的荧光团,它是非常有用的,因为你可以看到除了标记的结构之外的这些结构。

所以,使用TauconTrast给了您更多信息,或者它允许您分开您拥有的信息?

Timo Zimmermann博士:它给了我更多信息。如果样品中唯一的荧光信号是您用建立的荧光标记引入的荧光信号,则这些荧光标签均匀地分布在光谱上,因此不需要。但是,当您有更多信息,例如具有背景或复杂样本的示例时,使用寿命信息有助于分开不同的信息,因此当存在不同的结构时,更容易理解,即在其发射光谱中看起来类似的结构。荧光团的特征在于其激发和发射光谱及其寿命。得到所有三个字面上给你整个画面。鉴于荧光光谱中可以存在的显着重叠,这真正有所帮助。

研究人员还可以利用终身信息的其他用途是什么?

Timo Zimmermann博士:使用颤音的较厚样品中的背景清除非常有用。这是您可以用来将信号传送到不同区域的功能之一,并使用这些门来删除背景。对于苛刻的样本,例如厚的样品或超大胚胎,在侧面的终身信息具有很大的潜力,因为它允许您专注于更重要的并帮助您更好地了解这些复杂的样本。样品如此 - 思考有机体和模型生物 - 随着它们与真实生物学更好的变得越来越重要。并且您可以使用Tausense等新技术更好地观察这些样本。

拥有荧光寿命信息可以帮助你更好地理解复杂的样品。

Timo Zimmermann博士

除了获取终身信息,您认为STELLARIS还能为核心设施用户提供哪些其他好处?

Timo Zimmermann博士:这是一个非常完整的系统,因为它还具有其前身的独特功能,例如谐振扫描仪,AOTF(声光可调滤波器)和国内企业(声光分束器)可以去除所有的玻璃滤光片和分束器组件,或由于白光激光器的光谱自由。对我来说,这些仍然为共焦实验提供了关键的好处,而STELLARIS改进并增加了这些特性。

如果您正在运行核心设施,您的系统必须灵活,这反映在系统的设计中。Stellaris可以做一切我们需要在核心成像设施进行共用的一切,特别是因为它没有对检测侧的限制,并且您具有白色光激光的自由,并且可以根据需要进一步调整激发侧,添加固态激光如果你需要大量的力量。并且,如前所述,白光激光脉冲的事实,并且感谢它,您可以基本上免费使用寿命信息,是一个巨大的优势。

所以,它只是一个非常灵活的系统。它为来自所有不同角度的共聚焦实验提供了自由度:谐振扫描仪在成像期间可以在需要时切换出来时提供速度,并且还可以在模拟之间改变非常好的通用电源水平探测器。和光子计数模式。拥有两种模式是一个非常好的功能,为您提供了许多可能性。您可以在模式之间轻松切换,并为每个检测器单独设置它们,以便您对动态范围有很多选择。软件接口ImageCompass,具有新的荧光通道选择设计,可提供良好的可访问性。因此,对于我来说,Stellaris对共聚焦成像具有全面适用性。

在蒂莫·齐默曼在海德堡返回了埃博尔,面试于2021年2月举行。

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