这就是为什么徕卡LMD系统允许集合直接进入下游分析容器,例如PCT Microtubes,用于快速组织均质化,蛋白质提取和消化。
压力循环技术(PCT, PressureBioSciences Inc.)使用高压简化样品制备,用于质谱分析。PCT可以处理LMD在1小时内的样品,三个下方的最大活检组织片。
组合技术允许以高精度和速度分离肿瘤微环境。不同地区的下游分子分析将有意义,因为它们可以单独分析而不是混合物。
1.样品制备
通常,基于特殊的膜的载玻片用于激光微粉。样品制备LMD很简单,可以从经典的组织学准备中得到。
对于下游蛋白质组学,我们建议PET膜载玻片(几乎没有软化剂)或导演™允许完全膜消融的载玻片。
石蜡嵌入将组织样品带入可以切成薄片的结构中。或者,您可以使用Cryo-Defore来准备幻灯片。
我们会送合适的LMD幻灯片为您的申请。
2.固定和染色
组织的固定和染色LMD应用可以根据兴趣结构进行应用。这可以包括亮场和荧光染色。
该步骤可以用抛光器自动化。
通常,大多数污渍与下游蛋白质组学相容。尽管如此,它以前值得调查。
3.可视化和ROI
徕卡LMD系统可以生成自动示例概述,可用于容易地导航到您的兴趣区域(ROI)。
您的roi可以由ADM软件模块自动识别和标记,或者您可以手动应用形状。
- 有关Leica LMD系统的更多信息
- 激光微生物和教程
之前自动侦测
自动检测后
4.激光微粉
接下来,通过激光在视觉控制下解剖定义的ROI,并通过重力直接收集。
如果需要,在必要时分离癌症材料或任何其他ROI,如果需要,如果需要,在一个或不同的反应容器中。
您可以使用标准消耗品,例如PCR管。或将它们直接收集到下游分析容器中,例如,PCTμTubes(压力生物科学公司)以一种专用的LMD采集设备,请参见下一步。
5.蛋白质准备
可以做到微小样品的均质化,提取和消化物。G。压力循环技术(PCT)从压力Biosciences Inc.之后LMD-pct工作流程,这允许在一小时内肽的快速和可重复的肽(Lee S等人,细胞报告2020,doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066),节省几个小时,并为微小组织样品提供双样品制备。
有关此工作流程的更多信息,请访问:https://bit.ly/2AXxWdn
6.分析
通过质谱法分析样品并鉴定您的生物标志物。
典型的研究领域
- 生物标志物发现
- 癌症研究
- 个性化的药物
- 翻译研究
- 蛋白质组学
- 代谢组学
参考文献
- Lee S等人。,Cell Reports 2020,https://doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066
- Hunt AL等人,Cancer Res 2019;79 doi.org/10.1158/1538-7445.AM2019-4709
- Guo T等人。,Nat Med。2015;21:407-13
- Shao S等人。,蛋白质组学2015;15:1-11