冷冻后，在-90°C无水丙酮中从中间板中取出蓝宝石盘，并立即转移到含有2% OsO4的2ml Eppendorf管中，在-90°C中预冷徕卡EM AFS2冷冻替代装置．样品分别在-90°C、-60°C、-30°C和0°C下替换8 h，周期性的温度变化梯度为30°C/h。
样本然后用无水丙酮洗两次在4°C,沉浸在环氧树脂/环氧树脂33%无水丙酮在4°C一夜之间,紧随其后的是环氧树脂/环氧树脂66%无水丙酮在4°C 6 h,最后100%的环氧树脂/环氧树脂在室温下聚合前2 h 60°C至少24小时1.5毫升埃普多夫管。切片用醋酸铀酰和柠檬酸铅染色。
注意:在高压冷冻过程中使用乙醇作为同步液，对于蓝宝石盘上的细胞培养单层膜来说是没有必要的。
通过将蓝宝石盘放置在CLEM中间板上的电解槽朝上，上面覆盖着浸在1-十六烯的铝样品载体，100 μm的空腔面向电解槽。
