摘要

活细胞中G蛋白偶联受体(GPCRs)的单残留生物正交标记用于定量分析

为了在高性能显微镜下定量研究膜结合G蛋白偶联受体(GPCRs)，必须首先用明亮的光稳定染料对蛋白进行标记。标记方法应是微创的，以避免干扰GPCR功能和导致定量收率，以允许化学计量数据分析。为了精确地定量染料的产率，提出了一种基于荧光涨落显微镜(分子亮度)的方法。该方法可以在单细胞水平上提取标记位点的数量。由于所报道的技术使用的是商业上可用的显微镜，该方法可以用于膜蛋白的荧光显微镜的一般研究。

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插入非自然氨基酸代替263氨基酸的B类GPCR (CRF1R)的竞争标记。
插入非自然氨基酸代替263氨基酸的B类GPCR (CRF1R)的竞争标记。263TCO*-CRF1R可以使用两种有机染料在不同的相对浓度下竞争性地标记。此外，利用c-末端EGFP标记受体突变体263TCO*-CRF1R-EGFP，通过分子亮度测定不同表达水平的多个细胞中Cy3标记和EGFP标记受体的数量，计算出Cy3标记效率，如使用100% Cy3时。

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Serfling R, Seidel L, Bock A, Lohse MJ, Annibale P和Coin I:

活细胞G蛋白偶联受体单残留定量生物正交标记

ACS化学。医学杂志。20191461141 - 1149

出版日期:2019年5月10日

https://doi.org/10.1021/acschembio.8b01115

版权所有©2019美国化学学会

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