激光捕获显微解剖小鼠脊髓运动神经元细胞体制备用于转录组分析的RNA

从感兴趣的细胞中制备高质量的RNA对于精确和有意义的分析细胞类型之间或同一细胞类型在健康和疾病或药物治疗后的转录差异至关重要。运动神经元是许多神经系统和神经退行性疾病的研究对象，在脊髓中，运动神经元的制备由于运动神经元占细胞总数的不到10%而变得复杂。激光捕获显微解剖(LMD)，以解决这个问题。在这里，我们描述了一种快速恢复、冷冻和切片小鼠脊髓的方案，以避免内源性和外源性RNA酶对RNA的损伤，然后用Azure B在70%乙醇中染色来识别运动神经元，同时保持内源性RNA酶被抑制。LMD然后用于捕获染色神经元直接进入硫氰酸胍裂解缓冲液，保持RNA完整性。标准技术用于恢复总RNA并测量其完整性。该材料可用于下游分析转录本的RNA-seq和qRT-PCR。