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在高端共聚焦显微镜中集成的视频速率的精确和闪电快速荧光寿命成像

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Förster(荧光)共振能量转移(烦恼)已成为研究蛋白质 - 蛋白质相互作用和活性细胞信号转导的强大工具。烦恼通常通过检测供体和受体强度(敏化发射)的比率或通过检测供体的激发态寿命而读出,这随着越来越低地减少烦恼(荧光寿命成像或fl)。fl是强大的,免受漂白和固有的定量。在共聚焦显微镜上,fl通常通过时间相关的单光子计数(TCSPC)读出。这需要昂贵的附加硬件,并且固有地非常慢,需要增加许多连续扫描以到达低噪音寿命图像。因此,快速寿命更改,例如读出直播电池信令事件时遇到的那些烦恼传感器无法检测到。图像和/或非常慢扫描的累积也可以引起所获取的图像中的形态伪像。

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我们展示了SP8 Falcon.来自Lei188金宝搏的网址ca Microsystems,这是一家新的高端共焦仪,内置非常快fl能力。该仪器应用一种新颖的技术,将光子到达时间记录到高达80 MHz(如果使用两个探测器的160MHz)使用内置光谱分析器。要获得如此高计数率,仪器使用实时10 GHz采样和分析算法,使其在很大程度上免于脉冲堆积。鹘fl已完全融入其中拉斯-x软件,允许方便地获取fl时间失误,缝合fl概述图像,flXYZ堆栈和光谱fl堆叠等,以及其组合。

我们仔细审查了SP8猎鹰的性能,并将其应用于在高速 - 每秒大约(512×512)帧的尺寸(512×512)框架()每秒的阶段截止营地和CA2 +等第二信使浓度变化fps)。通过fl,我们利用我们最新一代基于EPAC的专用fl传感器,使用mturquoise2作为供体的伴侣和两个单体暗金属蛋白作为受体的串联。将图像格式缩短为128×128像素,我们获得了优质的质量fl在25 fps(使用谐振扫描)的25 fps(83 fps),允许检测甚至非常快的信令事件,包括例如例如。激活G-蛋白和Ca2 +火花。大量检测到的光子在计算的寿命中降低了像素到像素可变性。最后,我们证明SP8-Falcon是快速的理想选择fl以固定和Live-Cell格式筛选应用程序。

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