基于sted的对相关分析的纳米蛋白质扩散

我们首次描述了交叉对相关函数分析(配对相关分析或pCF)与受激排放损耗(发生的)，以获得低于光衍射极限(超分辨率)的空间分辨率的扩散图。我们的方法在具有高和低信噪比特征的系统中进行了测试，即分别在活的中国仓鼠卵巢细胞中短暂表达多个(>100)活性荧光蛋白和单体荧光蛋白的衣壳样粒子(Capsid Like Particles, CLPs)。后一种系统代表了在活细胞研究荧光蛋白嵌合体中通常遇到的条件。空间分辨率的发生的-pCF的波长约为110 nm，比传统的共焦采集技术提高了两倍以上。我们成功地应用了我们的方法来强调如何接近核包膜影响活性导入细胞核的蛋白质的流动性特征。值得注意的是,发生的-pCF揭示了局部扩散障碍的存在，以及在距离核膜两侧500-700 nm处存在一种慢组分。这种成分的流动性类似于前面描述的运输复合体。值得注意的是，所有这些特征在传统的共聚焦模式下是不可见的。