2016年3月24日教程

如何做正确的细胞培养快速检查

贴壁细胞传代的工作流程

许多生物医学研究领域，如癌症研究，药188bet怎么注册物开发和组织工程，需要使用活细胞进行各种测定。哺乳动物细胞培养物是生物学的必要工具，因为它们允许对不同细胞类型的快速生长和增殖进行实验分析。

为了成功地与哺乳动物细胞系合作，它们必须在受控条件下生长，并需要它们自己特定的培养基。此外，为了保证一致性，必须定期监控它们的增长。当细胞系达到约80%汇合时，必须进行传代培养，以确保细胞的正常生长和健康。80%融合是指培养容器表面80%被细胞覆盖。

本文介绍了一种典型的工作流程，用于传递粘附细胞系，其具有所有必要步骤的详细说明。

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视频:贴壁细胞传代的工作流程

为什么我要分裂我的细胞?

一旦细胞培养已经开始，由于细胞数量增加，营养消耗和有毒代谢物的增加，它不能无限种植，最终导致细胞死亡。此外，研究人员通常希望多次对其细胞进行实验，因此不希望立即使用所有细胞。传递或分裂细胞，产生与原始培养更低细胞密度的新培养物。通过除去培养基并将细胞转移到新鲜的生长培养基中，给予细胞新鲜营养素，除去毒性代谢物，允许长期维持培养物。

最初播种细胞后,生长迟滞期开始,继续一个日志阶段,细胞的增殖指数紧随其后的是一个固定相,增长率和死亡率相等(图1)。在死亡阶段,细胞死亡由于缺乏营养和生活条件不足。

图1细胞生长曲线:培养细胞的生长曲线由四个阶段组成:生长开始前的潜伏期(滞后期)、指数生长期(对数期)、细胞数量快速增长逐渐放缓的静止期和细胞死亡的死亡期，这是由于缺乏营养和错误的生存条件。对数期应更换培养基，细胞在达到固定期前应进行传代。

为了保持细胞的健康和活跃的生长，必须更新培养基并定期传代。根据细胞类型的不同，在对数期可发生多次培养基变化。细胞传代的最佳时间是在对数相和固定相之间，在细胞达到汇合之前。

为什么我需要检查我的细胞?

重要的是每天检查细胞培养，并在继代培养之前立即监测细胞健康，检查污染和确定何时分裂细胞。

通过眼睛的宏观水平，通过介质的颜色变化来首先对培养基中的真菌污染，浊度和颗粒的培养物以及意外的pH换档的第一次检查。此后，应使用倒置显微镜检查一般细胞形态和生长模式的仔细检查。倒置显微镜的光学器件位于标本下方。由于细胞连接到盘的底部，因此可以从该角度看待它们。观察应以100 - 200倍的总放大率进行相衬，因为大多数小区难以在正常明亮的场照明中观察。

哺乳动物细胞形态多样，但大多数培养的哺乳动物细胞可分为三类:成纤维细胞(Chinese仓鼠卵巢细胞(CHO))、上皮细胞样细胞(人宫颈细胞(HeLa))和淋巴细胞样细胞(人白血病细胞(HL60))。此外，某些细胞系还具有特定的形态特征，如具有非常长的树突状突起的神经元(SH-SY5Y)。细胞形态也受到细胞生命周期中事件的影响。在有丝分裂过程中，许多细胞呈圆形，形成可在培养基中漂浮的极具折射性的明亮球体。死细胞通常也会聚集和分离，但通常不明亮和折射。

不同的细胞系不仅大小和形状不同，它们的生长习性也不同。它们要么贴壁生长(成纤维细胞和上皮细胞)，要么悬浮生长(淋巴母细胞样细胞)。大多数贴壁细胞系以单细胞层(单层)的形式生长，附着在玻璃或处理过的塑料基质上(涂有聚赖氨酸、纤维连接蛋白、胶原蛋白或明胶)。