为什么这篇论文对今天的免疫学如此重要?
缺锌对免疫功能产生不利影响和对感染的反应，但据了解如何或为什么锌对人类免疫系统很重要。这篇报告[1]发现锌转运体SLC39A/ Zip7在早期B细胞发育过程中起关键作用，从而直接将锌稳态与免疫系统联系起来。Anzilotti等人的这项研究也是临床医生和研究人员之间的合作如何促进对原发性人类免疫缺陷的遗传和分子基础的更好理解的一个很好的例子。
功能性成像有多少帮助您了解患者正在发生的事情？
使用基因编码烦恼/fl通过生物传感器，我们能够对原代B细胞的细胞质和er保留的锌进行成像。这导致我们观察到，Zip7的畸形突变可以破坏细胞间的锌稳态。功能性锌成像有助于支持这样的假设，即锌平衡紊乱可能会改变局部激酶/磷酸酶活性，从而影响受影响个体的细胞信号传导和免疫功能。
让这些成像实验的遇到挑战是什么？你是如何设法克服它们的？
这烦恼/fl显微镜设置对我来说是一种全新的和不熟悉的技术。我们的论文有多种挑战，包括建立原发性CRAP-CAS9前B细胞培养物，在这些原代细胞中表达锌生物传感器，基本成像条件的标准化，例如最佳介质和表面，以保持细胞活着在成像期间等依靠等等，从惠克遗传中心和蜂窝影像核心的各种同事需要时间和很多帮助，以克服这些困难。最后，显微镜的众多审判和错误会话和太多的深夜对于获得这些实验来说是至关重要的。
在开始这个项目之前，你有多熟悉的终身成像？这些收购有多难？
在研讨会期间，我听说过这种技术，但从未使用过显微镜或先前的软件，并且是一个完整的新手。由于每次显微镜及其特定软件通常都是不同的，因此是一个急剧的学习曲线。但是，一旦我熟悉显微镜和软件设置，就会更容易进行收购。它真的帮助我从核心设施中支持，他们能够帮助建立和优化采集参数。
您将向尝试做类似功能实验的人提供什么律师？
如果您是使用新颖和尖端显微镜工具的完整新手，请确保您有良好的培训和指导，他们知道如何最好地使用显微镜。一旦您知道如何使用基本，您可以随时扩展边界并尝试新事物烦恼/fl设置。此外，适当和准确的图像采集只有一个步骤，实际数据分析和数字分析同样至关重要。这些需要大量的动手时间，数据分析是劳动密集型和缓慢的过程。希望，随着越来越多的非专家的第一个定时器拥抱这种技术，将有更大的激励措施来促进用户友好和自动图像数据分析。
您现在如何感受设计或运行Flim实验？您打算更多地使用此技术吗？
在测定细胞中细胞内锌的初始工作之后，我使用过烦恼/fl使用遗传编码的生物传感器，设置测量原发性B细胞中小GTP酶的活性。虽然我预计我需要不时需要技术援助，但我希望能够独立设置并运行实验，并以良好的信心分析数据。
