放大效果
图1显示了收紧实验采用了一个直径约为5 μm的圆形ROI，频率为1400 Hz的63x透镜。变焦从变焦6增加到变焦30，以匹配视场到5 μm ROI进行漂白。放大倍数为5时，每个区域的功率增加了25倍。使用传统的扫描仪，可以充分利用放大效果。在共振扫描器的情况下，我们必须考虑到共振x扫描器不能快速放大和缩小。这就是为什么放大x扫描器被阻塞在收紧向导。因此，即使是可用的最大激光功率也往往不足以有效地漂白。为了弥补x射线扫描仪无法快速缩放的缺陷，我们引入了收紧SP8的变焦。的收紧Zoomer使用y扫描仪进行放大，而x扫描仪保留其扫描角度。因此，放大可以应用于漂白内部收紧向导和RS至少为一个维度。
物镜后孔径填充系数的影响
改变物镜后孔径的填充系数有助于弥补由于快速扫描造成的漂白效率低的缺点。这可以通过收回光束扩展器光学(收紧增压)收紧向导。在第一步中，光束膨胀器可以整体缩回收紧序列(图2)。
如果这个选项是主动的，光束扩展器将从光束路径撤回。因此，物镜的后孔径不再完全充满光:光的数量是一样的，但集中在中心的一个点，大约2到5倍的光可用，取决于物镜(图3-5)。
图5:左:无收紧助推器。正确的:收紧助推器。两张图片都使用了相同的激光设置。绿色荧光蛋白- HeLa细胞中的微管蛋白，海德堡EMBL。
图6到8显示了结果收紧谐振扫描器实验:
- 图6:没有收紧升压,没有收紧放大镜
- 图7:没有收紧升压,收紧放大镜
- 图8:收紧升压和收紧放大镜
实验使用游离YFP的HeLa细胞。的收紧系列镜头采用40 × 1.1镜头拍摄，整个实验变焦系数为8。帧率约为36帧/秒，漂白时间约为200毫秒。如果你需要漂白更快，你可以使用所有的ar激光线漂白。
可以总结为收紧在RS实验中，应用所需激光功率的时间太短，无法有效地漂白感兴趣的区域。然后需要适当的调整，将可用的光线集中到一个较小的区域:最好的漂白效果可以通过结合收紧放大镜和收紧助推器。
