当你对纸屑老鼠样本进行成像时，你会面临什么挑战?
Prof. van Rheenen:成像纸屑小鼠有三个主要挑战。将深入小鼠仍然令人挑战挑战，仍然获得具有较大对比的图像。为了巨大对比，你想检测到每一个光子，但遗憾的是很多光都在组织中散落，因此丢失了。
其他挑战是避免由呼吸运动引起的图像扭曲。避免这些扭曲的一种方法是通过非常快地成像组织。然而，这也导致较少的光收集，因此成像对比度较少。
最后一个主要挑战是更具体的五彩纸屑，是图像和区分所有四种五彩纸屑颜色的能力。为此，可以在顺序模式下用单一优化波长激发荧光团，但这将导致较慢的成像采集时间，从而导致潜在的成像失真。为了避免这种情况，我们使用一个单一的次优波长同时激发所有荧光团，在这种情况下，只能根据荧光团的发射光谱来区分它们。不幸的是，五彩纸屑荧光团的发射光谱广泛重叠。传统的二向色法从来都不是区分所有荧光团的最佳方法，但有了[SP8 DIVE的]光谱探测器，这现在是可能的，而且容易得多，因为我们真的可以为你想要检测的每个荧光团优化波长。
用常规共聚焦MP仪器对这些样本进行成像时遇到的困难是什么?
Prof. van Rheenen:五彩纸屑样本中的细胞可以表达CFP，绿色荧光蛋白，yfp或rfp，并且您想将它们全部映像和快速。这会导致严重的问题。首先，所有这些染料不能用单个波长最佳激发。人们可以使用具有不同波长的顺序成像，但是，采集时间加倍，因此由呼吸运动引起的图像失真的可能性。此外，由于不同激发波长的色差，不同的纸屑图像将不在相同的Z级别获取。这也诱因伪像。
明天样品的光谱NDD成像的大优势是什么？
Prof. van Rheenen:新的探针有一个巨大的发展，每个探头都有自己的优化激励和发射光谱。特别是对于发射谱来说，它是繁琐的：你可以改变一个或两个过滤器，但你不是很灵活。当您在一个没有一个荧光团的样本中时，只有两种荧光团，系统必须一直优化。而且你没有所有的过滤器。通过光谱探测器部分，它更灵活，优化每个荧光团的检测。由于您正在为来自荧光团而出现的每一个光子而战，您真的需要优化要检测的频谱的哪个部分。此外，我们经常缝合数百个Z堆叠，以便以高分辨率大面积的组织图像。通过优化检测波长，我们可以同时通过图像同时进行图像，导致快速成像采集，这使我们能够随着时间的推移扫描大型瓦片扫描。
你今天有可能设想吗？
Prof. van Rheenen:是的，例如，我们不能真正区分自体荧光和YFP。虽然它们的发射光谱明显不同，但由于它们在黄色波长范围内重叠，传统的二向色法无法区分它们。有了光谱探测器，我们现在可以获得真正的发射光谱，从而真正分离出大部分重叠的荧光团，这是我们以前无法做到的。
你用非扫描光谱检测对纸屑老鼠进行成像的工作，会产生怎样的科学影响和前景?
Prof. van Rheenen:对于许多人所面临的许多研究问题来说，可视化细胞数小时、数天、数周甚至数月的行为是非常重要的。问题是，在许多组织中，细胞的位置，甚至是细胞的组成，都会随着时间发生巨大的变化。因此，长时间观察相同的细胞是绝对不可能的。
这些五彩纸屑小鼠绝对是独一无二的，因为您可以非常散落地标记单个单元格。因此，您可以在很长一段时间内追踪它们和图像单个单元格，并研究它们的行为。光谱分离NDD是很好的，因为我们现在同时最佳地检测所有染料。这对于实验非常重要，其中想要遵循多种小区类型或差异颜色编码的状态。在我们的研究中，我们使用这是为了同时研究干细胞和更分化的细胞，并在同一组织中可视化它们的行为方式。这对我们今天和明天的许多生物学问题来说真是关键。
Jacco van Rheenen在荷兰癌症学院的博士博士期间最初在各种成像技术中培训。他是第一个优化成像和开发软件来定量测量的烦恼共焦显微镜。在Jalink博士的实验室获得博士学位期间，在Sonnenberg博士(荷兰癌症研究所)的实验室担任博士后期间，他使用了几种显微镜技术来研究肿瘤细胞中的脂质信号。为了扩大他的范围，他获得了KWF奖学金，在美国约翰·康迪里斯博士的实验室做博士后。在那里，他扩展了自己的成像经验，通过对乳房肿瘤进行体内成像，包括双光子显微镜，并成为了生命活体领域的专家烦恼成像。2008年，他被任命为Hubrecht研究所的组长，在那里他利用他的成像技术来可视化乳腺肿瘤细胞在活体动物中转移所需的过程。2014年7月，他被任命为乌得勒支大学医学中心活体显微学教授。188bet怎么注册2009年，他获得了荷兰科学研究组织颁发的VIDI奖。2013年，他获得了干细胞青年研究者奖，2015年，他获得了ERC整合奖，2017年，他获得了Josef Steiner博士癌症研究基金会奖2017。
