利用超分辨率和常规成像技术研究亨德拉病毒感染不同细胞类型的详细形态学特征

背景
亨德拉病毒(Hendra virus, HeV)是副粘病毒科的多形性病毒。我们的长期目标是了解HeV病毒粒子的组装过程。作为第一步，我们试图确定最合适的细胞培养系统来研究这一过程，然后使用该模型来定义病毒的形态，并通过成像受感染细胞中的关键病毒编码蛋白来确定组装位点。

方法
用HeV感染一系列原代细胞和永生化细胞系，在感染后的不同时间点固定，标记HeV蛋白，并用共聚焦、超分辨率和透射电镜成像。

结果
不同感染细胞类型的病毒蛋白分布存在显著差异。在8 hpi时，内质网中检测到HeV G蛋白，核中主要检测到M蛋白。在18 hpi时，被hev感染的Vero细胞在整个细胞和透射电子显微镜下显示M和G蛋白(TEM)切片，呈多形性病毒样结构。在HeV感染MDBK、A549和HeLa细胞中，HeV M蛋白主要分布在细胞核中，细胞膜上有G蛋白。在初选HeV-infected牛和猪主动脉内皮细胞和两个bat-derived细胞系,戊肝病毒M蛋白在细胞核中没有见过在如此高的水平在任何时间点测试(8、12、18、24、48 hpi)但主要观察细胞表面与G蛋白co-localised点状的模式。这些阳性结构经鉴定为圆形的HeV病毒粒子TEM和超分辨率显微镜。SR成像首次显示副粘病毒蛋白的亚病毒粒子成像以及病毒粒子内HeV G、M和N蛋白的各自定位。

结论
这些发现为HeV的结构提供了新的见解，并表明在HeV成像研究中，组织培养细胞的选择可能影响实验结果。结果还表明，HeV应被认为是一个主要的圆形病毒，平均直径约280nmTEM和310 nm的SR成像。