基于多光子激发显微镜的三维扩散测量的新FRAP / FRAPA方法

我们提出了一种基于光博的定量三维分辨的扩散测量的新便捷方法（Frap.通过扫描激光束的多光子显微镜的扫描激光束或磁盘形面积的光活化（Frapa）。与先前报道的斑点光漂白协议相反，该方法具有光截面区域的尺寸的完全可扩展性的优点，因此可以方便地测量扩散系数的范围。该方法与低于和高数值孔径物镜兼容，允许我们在三维扩展样本以及非常小的体积中进行定量扩散测量，例如细胞核。此外，通过光漂白/光激活大面积，可以分开测量沿光轴的扩散，这在研究各向异性扩散时是方便的。首先，我们展示了模型的严格数学推导，导致描述荧光回收/再分配阶段的闭合性公式。接下来，多光子的能力Frap.在许多测试解决方案上彻底测试正确测量绝对扩散系数的方法菲特- 覆盖各种扩散系数的extrans。对于具有不同粘度的一系列光活化绿色荧光蛋白溶液的FRAPA方法是相同的。最后，我们将该方法应用于在活性NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞核中自由扩散的光活化绿色荧光蛋白。