故事

Giardia Lamblia - Cryo-SEM的样品制备

Leica Em Ace900 - 生命科学研究的应用笔记

将100目铜栅格(12μm厚度)浸入浓缩的Giardia悬浮液中,并用划伤的表面夹在两个平坦的3mm铝样品载体之间。随后,将夹层转移到中间板(直径3.1mm)的加宽孔中。

在顶部添加50μm间隔环,标本立即冷冻HPM100.高压冷冻机,无需使用醇作为同步流体。

载体夹层安装在自制3毫米支架上VCT100.装载站并转移到一个ACE900.使用VCT100 Shuttle和安装在ACE900上的VCT500码头的原型(通过适配器板连接)。冷冻阶段设定为-120°C,并且支架坐在那里,以10min达到来自液氮的平衡。通过用压裂刀从顶部载体推开顶部载体,然后在-105℃下部分冷冻干燥5分钟来破裂样品。将样品涂覆(e-束蒸发),其中25nm铂/碳的层,角度为45°,不旋转,然后在90°下进行4nm的C.

在第二个样品中,未进行冻蚀,将其在-150℃下破裂,并立即涂覆2,5nm Pt / c和4nm的C,与之前的相同的角度,没有旋转。使用Leica将样品转移到Zeiss Auriga 40扫描电子显微镜中的冷冻阶段em.VCT100班车在由冷却罩包围的高真空条件下保持样品。使用Inlens二次电子检测器在-115°C下获得图像。

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概括

结果
使用所述设备生产整个生物体的大,清洁骨折面。在压裂后通过部分冷冻干燥暴露超微结构细节,例如细胞器和细胞骨架组分。样品在显微镜中稳定,并成像几个小时。

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