关于Roland A. Fleck
ROLAND a . FLECK，博士，FRCPath, FRMS，超微结构成像教授，伦敦国王学院超微结构成像中心主任。他专门从事低温下细胞损伤和低温保存机制的基础研究，在组织冷冻骨折/冷冻蚀刻制备和更广泛的低温显微镜技术方面发展了专业知识。作为超微结构成像中心的主任，他支持通过传统室温和低温电子显微镜对细胞和组织进行先进的三维研究。他是哥本哈根大学健康和医学科学院客座教授，乌克兰哈尔科夫国家科学院低温生物学问题研究所教科文组织低温生物学主席教188bet怎么注册授。
你们部门在做什么?你们实验室主要使用什么工作流程?徕卡工作流组合如何支持这些?
我们支持国王学院的所有研究活动，即主要是生命科学，但我们也支持材料和化学科学基础研究。我们使用的工作流程是室温和低温各占一半新兴市场．室温研究支持诊断新兴市场对于穿刺活检来说这是非常直接和传统的。有一个新兴市场TP用于室温样品制备，然后用新兴市场用UC7切片机进行切片，然后成像TEM．还有很多更先进的室温样品制备细胞和组织切片，同时保持方向，然后成像。样品也在树脂中制备，用于类似串行块面扫描显微镜的过程，这也是相当传统的。不过，我们确实用徕卡振动器来准备组织。
接下来是高通量冷冻技术，我们做了大量德康的工作，很轻的固定，但在-80°C下用冷冻箱进行切片，然后用免疫金标记和成像TEM．然后是更高级的，高压冷冻，冷冻替代，免疫金标记，和断层摄影工作流程。我们有额外的功，这是纯低温的。例如，我们有一些结构生物学，单粒子项目，使用新兴市场GP，吸压柱塞和冷冻器TEM我们也使用CEMOVIS技术准备冷冻组织切片。因此，先进行高压冷冻再冷冻切片，再冷冻TEM工作流。之后就是低温了扫描电镜工作流。所以本质上，我们使用高压冷冻新兴市场ICE，冻结压裂系统新兴市场ACE900,新兴市场VCT500传输带新兴市场VCM装载站和JEOL 7800 prime用于冷冻扫描电镜有一个VCT冷冻级。
低温扫描电镜调查的好处是什么?
它要快得多。就像我们前几天展示的，我带了一个样本进了实验室有一张高分辨率的图像扫描电镜不到两小时。我们还在中间吃了午饭。那很方便。所以，它又快又快，表现又现代扫描电镜意思是你从细胞膜上获得的信息和从TEM．你也可以得到地形信息，因为信号采集的性质扫描电镜．
使用低温扫描电镜工作流程，您通常会调查哪些类型的样品?
细胞和组织。特别是细胞，非常有趣。所以，任何有很多不同的细胞器和结构的相对复杂的样本你想用相当高的放大倍数来观察是用低温研究的理想选择扫描电镜．例如，像果蝇胚胎这样的东西就很好，因为组织有很多复杂性。疟疾寄生虫在红细胞内，因为它是一个有趣的，复杂的结构，它有点太大了，不能把一个像样的部分TEM．的扫描电镜用高倍放大给你一个更广阔的视野，这才是你真正的收获。
您在哪些研究领域使用了高压冷冻EM ICE?
高压冷冻机非常有用，因为它是工作流程中不可或缺的一部分。我们可以对它进行电刺激，这是神经科学家喜欢的。我们也有光刺激，这是神经科学家在电刺激出现之前使用的。我们有兴趣重复利用光刺激对其他光学响应样品。我们还准备了6毫米和3毫米的样品，在联锁载体和管系统，所以这是一个相当通用的工具。
您选择EM ICE的标准是什么?
188bet官网1服务和支持。我认为这是一种高质量的乐器。在我看来，它比HPM100要好。原则上，它背后的理论如何传递冷却是最佳的方式传递冷却，并把热量从样品。它比湍流输送冷却剂更有效。我不太喜欢新兴市场PACT结构在冷却和压力之间有一个分离。而新兴市场ICE回到了与HPM010相同的基本设计，但有一些改进。我认为它在理论和技术设计方面很好，我得到了可靠的服务和支持。188bet官网1
EM ICE的可用性如何?
训练一个人使用它是很容易的。但我认为如果你是一个有经验的用户在一些更手动的仪器上你可以一样快。与HPM100不同的是，我在HPM010上一致地更快地将样本转移到LN，而在我看来新兴市场对于一般的操作人员来说，ICE的速度一直是一样快的，这正是它有用的原因。让每个人都按照相同的标准工作很容易。
你为什么要在实验室里安装电磁ACE900 ?
因为多年来我一直在研究冷冻压裂系统，所以我知道它们的用途有多广泛。这是一个非常强大的高真空低温处理工具，它站在我大部分工作流程的中间。所以，我得到了一个非常高质量的涂层，腔室非常干净，因为它总是处于高真空状态，真空转移能力进入扫描电镜是杰出的。你不需要是一个特别有经验的用户来获得好的结果。这才是真正的原因。这是一个非常非常强大的工具。
您如何看待利用低温扫描电镜(SEM)以及经典的复制透射电镜(TEM)工作流程进行冷冻断裂研究的前景?
我个人认为应该多使用冷冻剂扫描电镜因为现代场发射枪的性能扫描电镜是如此高，如此容易实现如果你有一个强大的高压冷冻，冷冻断裂系统，冷冻转移系统，你应该能够使用这个系统进行常规的高分辨率工作，但你必须了解工作流程。但是工作流现在对于普通用户来说是相当容易访问的，你不需要成为一个专家来让它工作。对于经典的冷冻骨折，我个人的感觉是如果你将它与免疫标记技术和更先进的技术结合起来，它会发挥作用新兴市场技术，但它们都是相当困难的发展和应用正确。
在做研究项目时，徕卡的工作流程有哪些优势?
最主要的是，理论上，不同乐器之间的兼容性。理想的情况是，这些小纸片应该与我想要做的冷冻骨折工作类型相匹配也应该与可以进入的阶段相匹配扫描电镜．同样的故事也适用于我想要冷冻不同组织的替代品所以这真的是关于确保每一个耗材都匹配设备并且在工作流程中很容易转移到下一个设备上。在很多情况下，徕卡微系统都有这种功能。188金宝搏的网址
