罗兰·a·弗莱克
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故事

在低温SEM工作流程中的高压冻结和冻结压裂的专家知识

对伦敦国王学院超微结构成像中心主任Roland A. Fleck的采访。

英国伦敦国王学院超微结构成像中心的研究重点是生命科学,特别是神经生物学主题,即大脑的组织和突触囊泡如何在膜上融合。它们还支持相关的医学研究,如疟疾寄生虫项目或化疗和行188bet怎么注册为,特别是动物细胞模型系统和发展。深入了解实验室的工作方法,了解Cryo的优势扫描电镜调查新兴市场样品制备。找出如何高压冻结,冻结压裂和低温转移添加到低温扫描电镜工作流程以及徕卡组合如何确保这些不同步骤之间的兼容性。

罗兰·a·弗莱克

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关于Roland A. Fleck

ROLAND a . FLECK,博士,FRCPath, FRMS,伦敦国王学院超微结构成像教授和超微结构成像中心主任。他专门从事低温和低温保存条件下细胞损伤的基础研究,发展了组织的冷冻断裂/冷冻蚀刻制备和更广泛的冷冻显微技术的专业知识。作为超微结构成像中心主任,他支持通过常规室温和低温电子显微镜对细胞和组织进行先进的三维研究。他是哥本哈根大学卫生和医学科学学院的客座教授,也是乌克兰国家科学院低温生物学问题研究所乌克兰哈尔科夫联合国教科文188bet怎么注册组织低温生物学讲座教授。

你的部门在做什么?你的实验室主要使用什么工作流程?徕卡的工作流程组合如何支持这些?

我们支持国王学院的所有研究活动,主要是生命科学,但我们也支持材料和化学科学基础研究。我们使用的工作流程是在室温和低温之间对半分成新兴市场.室温研究支持诊断新兴市场对于非常直接和传统的针活检工作。有一个新兴市场用TP进行室温样品制备,然后用新兴市场UC7切片机进行切片,然后用TEM.也有许多更先进的室温样品制备细胞和组织切片,同时保持方向,然后成像。样品也在树脂中制备,用于串行块面部扫描显微镜等过程,这也是相当传统的。不过,我们确实用徕卡振动器来准备组织。

说到高通量低温技术,我们做了很多德康式的工作,非常轻的固定,但是在-80°C的低温箱中进行切片,然后用免疫金标记和成像TEM.然后是稍高级的高压冷冻,冷冻替代,免疫金标记和断层摄影工作流程。我们还有额外的功,那就是纯低温。例如,我们有一些结构生物学,单粒子项目,使用新兴市场GP,吸干柱塞,冷冻TEM我们还用CEMOVIS技术准备了组织的冷冻切片。因此,高压冷冻和低温切片,然后冷冻TEM工作流。之后就是低温了扫描电镜工作流。所以基本上,我们使用高压冷冻新兴市场ICE,冻结断裂系统新兴市场ACE900,新兴市场VCT500传输新兴市场VCM装载站和用于冷冻的JEOL 7800 prime扫描电镜用VCT冷冻台

低温扫描电镜研究的好处是什么?

它要快得多。就像我们前几天展示的那样,我带了一个样本到实验室用扫描电镜不到两个小时。我们还在中间吃了午饭。这很方便。所以,它又快又快,又有现代的表现扫描电镜意味着你从膜上获得的信息和从TEM.你也可以得到地形信息,因为信号采集的性质扫描电镜

你通常用低温扫描电镜工作流程调查哪些类型的样品?

细胞和组织。特别是细胞,非常有趣。所以,任何相对复杂的样品,有很多不同的细胞器和结构,你想用相当高的放大率观察,是理想的研究低温扫描电镜.例如,像果蝇胚胎这样的东西就很好,因为组织非常复杂。疟疾寄生虫在红细胞里,因为它是一个有趣的,复杂的结构它有点太大了,不能把一个像样的部分TEM.的扫描电镜在高倍放大的情况下,你可以看到更广阔的视野,这才是你真正的收获。

您在哪些研究领域使用高压冷冻EM ICE?

高压冰箱非常有用,因为它是工作流程中不可或缺的一部分。我们在上面有电刺激,神经科学家喜欢这样。我们也有光刺激,在电刺激出现之前神经科学家就在使用光刺激。我们有兴趣将光刺激重新用于其他光学响应样本。我们也准备6毫米和3毫米的样品在联锁载体和管系统中,所以这是一个相当多用途的工具。

您是根据什么标准选择EM ICE的?

188bet官网1服务和支持。我认为这是一种高质量的乐器。在我看来,这是对HPM100的改进。原则上讲,它传递冷却的原理是传递冷却并将热量从样品中带走的最佳方式。它比紊流输送冷却剂更有效。我不太喜欢新兴市场PACT配置,在冷却和压力之间有一个分离。而新兴市场ICE采用了与HPM010相同的基本设计,但进行了一些改进。我认为它在理论和技术设计上都很好,我得到了可靠的服务和支持。188bet官网1

EM ICE的可用性如何?

训练一个人是很容易的。但我认为,如果你是一个经验丰富的用户,在一些更手动的仪器,你可以一样快。与HPM100的区别是,我可以更快地在HPM010上始终如一地将样本转移到LN,而在我看来新兴市场ICE对于一般的操作人员来说一直都是一样快的,这就是它有用的真正原因。让每个人都达到相同的工作标准很容易。

为什么你选择在你的实验室使用EM ACE900 ?

因为有多年的冷冻压裂系统工作经验,我知道它们是多么的万能。这是一个非常强大的高真空低温加工工具,在我的大部分工作流程中处于中间位置。所以,我得到了一个真正高质量的涂层,腔室非常干净,因为它一直处于高真空状态,真空转移能力进入扫描电镜是杰出的。你不需要是一个特别有经验的用户来获得良好的结果。这才是真正的原因。这是一个非常非常强大的工具。

您如何看待低温扫描电镜以及经典的复制TEM工作流程在冻结断裂研究中的未来?

在我个人看来,应该更多地使用低温扫描电镜冻结断裂,因为现代场发射炮的性能扫描电镜是如此之高,如此之容易实现,如果你有一个强大的高压冷冻,冷冻断裂系统,低温传输系统在它后面,你应该能够使用系统常规高分辨率的工作,但你必须了解工作流程。但是现在的工作流程对普通用户来说是相当容易访问的,你不必成为一个专家来让它全部工作。就经典的冷冻骨折而言,我个人的感觉是如果你将它与免疫标记技术和更先进的技术结合起来,它可以发挥作用新兴市场技术,但它们都很难发展和正确应用。

徕卡工作流程在做研究项目时有哪些优点?

从理论上讲,最主要的是不同仪器之间的兼容性。理想的情况是板板应该与我想做的冷冻骨折工作类型相匹配也应该与可以进入的阶段相匹配扫描电镜.如果我想要冻结不同组织的替代,也应该采用同样的方法,所以这真的是要确保每一个消耗品都与设备匹配,并且在工作流程中随时可以转移到下一个设备。在很多情况下,徕卡微系统都有这种功能。188金宝搏的网址

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