皮质贡献复杂的学习

多层大鼠皮质组织中的脑化学标记神经元的尖锐成像

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介绍

本文介绍了使用夏普,高对比度成像,以促进病毒构建放置在大鼠皮质脑组织中的评估。通常通过使用啮齿动物模型来调查复杂的学习。为避免与永久性大鼠脑病变相关的限制,可以进行化学诱导的临时灭活。该方法涉及使用病毒构建体,将外国DNA(受体)和荧光标记物递送至特定脑区内的细胞。接下来,通过施用激活受体的药理剂来实现感兴趣区域的临时失活。可以使用这种方法,学习,记忆,动机和其他行为可以在感兴趣区域中与大脑活动进行评估。对这项研究至关重要是验证病毒结构的正确放置。在使用时,对放置的评估更容易提供免费的雾化图像雷霆成像仪组织而即时计算清算(ICC)。

介绍

神经科学家用来调查复杂学习的一种方法是评估啮齿动物中特定脑区损坏的影响。化学物质[1-3]可以暂时用于临时,而不是永久地非活动的感兴趣区域。该两步方法涉及将一种修饰的异物DNA(A受体)和荧光标签的病毒介导的递送至特定脑区内的细胞。接下来,施用药物剂激活受体并诱导细胞的暂时失活。因此,调查人员可以将化学生物与学习范例结合起来,以评估具有感兴趣区域的神经活动的行为和没有神经活动。评估和验证病毒构建体的正确放置是该研究的重要组成部分,并且需要使用复杂的成像。

挑战

一种成像解决方案,可以快速筛选厚3D皮质组织标本并实现夏普,高对比度成像,其中在样本内部深入的重要细节清晰地解决,对于皮质脑区非常重要。这些皮质区域由六个不同的神经元组成;能够确定哪些层包含标记的神经元提供了关于底层复杂学习的神经电路的重要信息[2,3]。传统的宽场显微镜提供用户速度和检测灵敏度,但遗憾的是,由于来自厚度浓缩标本的焦点飞行,显着的图像对比度,通常存在焦点的模糊或雾度。显着的图像对比度[4]

方法

利用a获取表达增强的绿色荧光蛋白(EGFP)的神经元的大鼠皮质组织的荧光图像雷霆成像仪组织用hc plapo.,40x,0.95 na(数值孔径)目标和DFC9000 GT相机。即时计算清算(ICC)被应用以除去雾霾[4]

结果

下面的图像是表达EGFP的大鼠皮质组织中的神经元。

结论

传统的宽ffield荧光显微镜图像显示朦胧。但是,使用技术即时计算清算(ICC)[4]显着增强对比度。与典型的宽泛成像相比,雷霆成像仪允许更容易,更准确地评估大鼠皮质脑组织中病毒构建体的正确放置。

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