结合STED和生命周期的好处

星宿故事:采访阿尔贝托·迪斯普罗教授

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在这次采访中,Alberto Diaspro教授谈到了白光激光器的优势和STELLARIS 8的TauSTED能力发生的.他讲述了他在使用TauSense、荧光寿命成像和相量分析的研究项目中使用共聚焦系统的经验。

Alberto Diaspro是热那亚大学物理系应用物理系的全职教授。他也是意大利理工学院(IIT)纳米研究线的首席研究员。Diaspro教授创立了lamb(高级显微镜、生物成像和光谱学实验室),并撰写了400多篇国际出版物。他是多光子显微镜、远场光学纳米镜、三维成像、荧光、无标签和光学超分辨率显微镜的专家。

感谢阿尔贝托今天与我们对话。你能告诉我们更多的原因,让你购买STELLARIS 8共焦系统吗?

我最感兴趣的规格是白光激光器。然后是像STELLARIS一样使用荧光寿命数据的可能性。这两个方面对我们来说非常有趣,因为我们在实验室中使用寿命数据和相量分析已经很长时间了。

当你谈到相量时,你指的是STELLARIS 8系统的TauSTED能力…

是的,我认为TauSTED是一个很大的飞跃发生的.它鼓励人们使用发生的同时利用单光子计数的优势。

所以如何?

生物实验的出发点是问“我对什么感兴趣?”然后,“我需要多高的分辨率才能看到它?”假设我知道我需要的分辨率低于衍射极限。在实验室里有一个系统,可以用两个激光和一个旋钮,选择一个特殊的分辨率来回答我的生物学问题,然后用第二个激光和旋钮来提高实时的空间分辨率,这是多么令人兴奋啊?

TauSTED的意思是有一个非常高分辨率的图像,因为你有额外的数据,荧光寿命信息,你可以用一种聪明的方式来重建图像。一位非常著名的科学家在20世纪40年代说过我们无法克服衍射极限。衍射是存在的,我们只是增加了信息——当我们重建图像时,我们得到了更多的细节。我们现在可以用TauSTED做的是以一种智能的方式添加信息,利用额外的信息来改善图像重建。这适用于共焦成像,多光子,发生的或者其他的对比机制。

这让我们回到为什么你会被白色激光系统所吸引。

是的。我们选择了STELLARIS,因为白光激光(WLL)是一种关闭光谱圈的方法-你可以使用非常大量的光子来光谱探测物种国内企业.你有一些非常重要的东西:尊重光子,不丢失照片,以最好的方式使用所有到达的照片。使用白光激光,我可以在激励光谱周围的一个区域调整我的激励,而不是使用固定的激光线。使用WLL我也可以在光漂白方面进行优化。当我们处理荧光分子时,在激发谱的最大值处激发并不总是最好的。在某些情况下,如果你能在其他领域工作,在回答生物学问题和需要减少光漂白时,这是一个非常大的优势。

简而言之,对我们来说,拥有一个WLL的主要好处不是你可以同时成像8个荧光信号。这很好,但对我们来说,最大的好处是我可以自由地调整激励和检测。这是非常重要的照明的时间调制。

拥有WLL的另一个重要方面是培训用户。这就是你在培训新一代显微镜师时想要的那种系统,因为你可以自由地选择用于激发的波长,并在光谱检测中进行调整。这有巨大的价值,因为它可以帮助他们真正开始理解荧光发生了什么。

《星之星》还有其他方面对你的工作有帮助吗?

我还发现了另一个吸引人的方面:新型探测器家族。当你有能够进行单光子计数的探测器时,你需要它们,因为你要处理寿命,这意味着在饱和方面没有更多的问题。这对生命科学研究非常重要,对我的材料科学项目也很重要。

总的来说,这是共焦技术的一大飞跃。分辨率非常好。你通过使用荧光面板来指示系统你想要什么真的能帮助你理解你在做什么。光学切片也很好。当你需要一定的空间分辨率时,你进行采样的方式。我告诉我这些天遇到的所有人,这是我职业生涯中最好的商业共焦系统。

但对我来说,最好的是你展示与寿命有关的数据的方式。我们已经使用相量方法很长一段时间了,来浏览荧光图像并了解发生了什么。当你在超分辨率下工作时,这是一个很大的优势

当涉及到设置实验时,您的系统如何帮助您?

这是帮助您的仪器:调节激发的可能性有助于为您的样品添加最佳的制备。你可以同时进行光谱学和显微镜检查。用户可以真正优化他们使用该系统收集的数据类型。然后切换到发生的这太棒了。发生的这并不意味着只有超分辨率,这意味着你可以自由地导航到你感兴趣的特殊分辨率,通过转动旋钮,直到你找到你想看的东西。这很令人兴奋。我必须承认,当你在研究STELLARIS 8时,很难离开实验室。你开始探索系统的所有潜力,但你没有意识到时间在流逝!

当你训练时,STELLARIS和其他共聚焦显微镜有什么区别?

他们可以开始思考在特定波长激发意味着什么。他们可以在开始一系列图像采集之前实现光谱学,例如,30或50张幻灯片。如果在一开始,他们不是刚开始获取数据,而是有机会通过调整激励和光谱窗口来了解发生了什么,他们的实验将会得到更好的优化结果。这让他们明白激发荧光分子意味着什么。它首先遵循系统在设置中选择荧光团时给出的建议。但同时也有能力操纵激发和检测光谱,在不同波长之间滑动,让他们体验到信息,而不是简单地相信它。一个很好的例子:许多研究人员认为激发荧光素的最佳波长是488nm,因为在其他单线激光器系统中,这是他们可以使用的最佳波长。但是如果你可以移动它,你可以跟随真实的激发光谱,你可以看到这个光谱在样本条件下会改变,然后你就可以看到激发和发射中的肩。当你收听时,你可以看到效果,你可以去除不需要的信号。当然,这对训练是有好处的,但对实验的结果也是有好处的!

是否有特定的应用程序可以从使用STELLARIS 8中受益?

当你有一个固定的样本时,我不是说一切都很好,但或多或少,一切都很好。但是,当你有一个活样本时,你可能需要改变当前的状况,以便更好地跟踪正在发生的事情。然后,我们有关于你所做的事情的定量信息,就功率而言,就激发体积而言…你有所有这些数据,加上可调性。这就是你优化活细胞成像的能力,就在你面前。

研究人员使用STELLARIS系统和TauSense工具的经验是什么?

这是一种新的世界发现。首先,理解如何处理这些数据似乎有点令人生畏。获得终身信息意味着什么?但是当他们开始使用它时,他们明白了能够使用寿命信息来区分荧光物种并更好地理解自发荧光的情况是否真的有额外的价值。

你会对那些认为WLL并不适合他们的人说些什么?

使用白光激光,你可以更好地控制你的实验,但你需要对你想要进行的实验有更多的了解。你正在给你的实验添加光谱学,你需要决定在哪里放置你的激发光谱来优化你的样本。对于不太熟悉显微镜的研究人员来说,这可能有点可怕,但它有助于他们了解如何最好地优化他们的实验,这样他们就可以避免光漂白等事情,从而真正从样本中获得最佳信号。做科学而不仅仅是成像。

这个WLL很容易调优。对我们来说,我们最大的愿望是能够使用WLL来获得一生的数据,现在你已经做到了。我们也想表演烦恼因为WLL非常适合它。你可以接近烦恼以任何你想要的方式:光谱漂移,寿命,并且没有由于限制在固定波长而导致的受体或供体不必要的光漂白。现在你可以选择最好的波长而不破坏你的实验。

今天,我认为这是我实验室里最好的显微镜。

Alberto Diaspro教授

那红色区域和近红外区域呢?

是的,我们有一些研究人员想要使用它。主要是因为标签的效率和实验的持续时间。当你转向红外光谱时,你可以进行更长时间的实验,大多数对胚胎和斑马鱼感兴趣的研究人员,厚的活样本,肯定能从红色扩展中受益。如果你需要图像深度,向红色移动总是最好的。

那么,在我们结束采访之前,你还有什么想分享的吗?

让我告诉你,我们有来自徕卡微系统团队最好的技术支持。188金宝搏的网址每次接到电话,我们都能在很短的时间内得到答复——了解发生了什么,并解释该怎么做,迅速解决问题。这对我们来说是一个巨大的价值,因为我们的系统已经被订满了。对我来说,徕卡微188金宝搏的网址系统的技术服务是意大利最好的。188bet官网1当你在实验室中188bet官网1为自己的研究获得一个商业系统,并在机构设施环境中共享时,良好的服务就会产生影响。

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