用双色时门控刺激发射耗尽(STED)纳米显微镜观察免疫突触

自然杀伤细胞形成严密调控，精细调整的免疫突触(IS)，以裂解病毒感染或致瘤细胞。动态的肌动蛋白重组对NK细胞的功能和is的形成至关重要。f -肌动蛋白在突触处的成像传统上使用共聚焦显微镜，但是光的衍射极限限制荧光显微镜(包括共聚焦)的分辨率约为200 nm。近年来成像技术的发展使得亚衍射限制的超分辨率成像技术得以发展。为了在IS上看到f -肌动蛋白的结构，我们通过将NK细胞粘附在玻璃上激活的受体上来再现NK细胞的细胞毒性突触。然后，我们使用双色受激发射耗尽显微镜(发生的)。这导致突触的分辨率小于80 nm。在这里我们描述了样品制备的步骤和双色图像的获取发生的用纳米显微镜观察f -肌动蛋白在NK IS中的作用。我们还说明了优化的样本采集使用徕卡SP8软件和时间门控发生的．最后利用惠更斯软件对图像进行反卷积后处理。