介绍
裂变酵母Schizosaccharomyces Pombe是一款ascycete单细胞真菌，它曾作为研究支持寿命的不同生物过程的重要模型系统，例如细胞周期，细胞形态发生，细胞凋亡和老化[1]。然而，其小的细胞大小利用常规显微镜检查对活的采集研究产生了重大挑战，其中小结构出现在焦点外光。因此，传统上使用纺丝盘显微镜进行这些研究。
方法
一种雷霆成像仪3d直播细胞已被用于即时计算清算（ICC）[2,3]为了获得表达环标记RLC1-MCHERRY（Myosin II监管轻链）和主轴杆体标记PCP1-的活裂变酵母细胞的夏季4D图像GFP.（Pericentrin / kendrin）。为了克服通常用于生长酵母的常用培养基的高自发荧光水平，例如是的，将细胞安装在琼脂糖涂布垫的顶部上，以最小化所需的培养基量。
结果
下面的图像证明了雷霆成像仪3d直播细胞与ICC一起能够提供荧光标记的裂变酵母细胞的清晰高度对比度的图像。
视频1：分割裂变酵母S.Pombe用两个标记针对主轴杆体染色（PCP1-GFP.，绿色）和细胞因子环（RLC1-MCHERRY;红色）。左：原始宽场成像。右：雷声与ICC成像。Javier Encinar del Del Del Dedo的样品安装和协议，由Elena Rebollo，SomeCular成像平台，西班牙巴塞罗那分子生物学研究所的图像采集。
单元安装协议（通过Javier Encinar del Dedo）：
- 将0.2g琼脂糖溶解在10ml培养基中并保持在65℃以避免凝固。
- 将15μl涂布溶液移液在预热在42℃的载玻片上，然后将第二载玻片放置在顶部并保持15分钟。
- 除去第二次载玻片后，琼脂糖垫准备在早期对阶段的1.5μL细胞移液。
- 在进入显微镜之前，最终将盖玻片放置在细胞的顶部。
- 建议使用水浸透镜来帮助避免光学像差（63×1.2NA）以改善计算清算。
这种简短的协议使得在与a成像时，可以在约1小时内进行裂变酵母部门。雷霆成像仪3d直播细胞。大约16个平面和微小的刻度间隔用于在亚细胞水平上实现低光漂白和尖锐的成像。
