02年9月，2021年

骨骼肌适应性与纤维化疾病

荧光标记肌细胞的高对比度成像评估损伤和再生

C2C12细胞用lamin B(洋红色)、Hoechst(蓝色)、yH2AX(黄色)染色。A)原始宽场荧光图像;B) LVCC后的THUNDER图像。黄色的区域表明DNA受损。muscle_thunder_app_note_fig_abstract.jpg

本文描述了骨骼肌如何适应纤维化病理的机制，可以更有效地研究C2C12小鼠成肌细胞的快速、高对比度成像。更好地了解肌肉纤维化疾病和受伤的细胞再生可能导致新疗法的发展。肌肉再生研究需要能够快速筛查肌肉组织并准确评估细胞损伤的成像解决方案。在这项研究中，用dna损伤标记标记成肌细胞，然后使用荧光成像技术THUNDER成像仪活细胞使用大容量计算清理(LVCC)。与传统的宽视野显微镜相比，dna标记灶(即细胞损伤)的定量更容易完成。

介绍

为了在肌肉病理方面取得进展，如肌肉营养不良和脑瘫，重要的是更好地了解骨骼肌适应的机制，重点是与许多这些病理相关的纤维化过程[1,2]．研究人员试图揭示细胞外基质的结构与肌肉的机械功能和肌肉干细胞的再生能力之间的关系［3］．希望这些研究能够为纤维性肌肉疾病带来新的治疗方法。研究的主要领域之一是检查损伤后的肌肉细胞再生。为了评估肌肉细胞的损伤，可以用DNA损伤标记标记它们，并用荧光显微镜成像。

挑战

对于这个肌肉适应研究，有一个可以快速筛选细胞培养标本的成像溶液是很重要的。它还要求图像质量高，以便能够清晰地分辨标记DNA损伤的病灶。当成像较厚的标本时，溶液也应该能够在内部较深的点有良好的对比度。宽视野显微镜为用户提供了速度和检测灵敏度，但由于厚样本的失焦面信号，经常会出现失焦模糊或薄雾，显著降低了图像对比度［４］．

方法

本研究中，C2C12小鼠成肌细胞［3］，检查肌纤维的前体，被检查。将细胞生长并迁移到Transwell膜的两侧上，并用Lamin B（洋红色）染色以标记核结构，Hoechst（蓝色）标记为DNA，以及Yh2ax（黄色）表示DNA损伤。通过计数焦点评估通过小收缩孔隙3D迁移后细胞损伤。使用a获取细胞的荧光图像THUNDER成像仪活细胞63X/1.4 NA(数值孔径)油浸物镜。大容量计算清理(LVCC)，由即时计算清理(ICC)和自适应决策掩码反卷积组成［４］，被施用于去除雾度。