徕卡EM PACT2
通过在直径8厘米的活塞上施加3棒,一个产生大约150 kp的力。这种力传递给直径为3毫米的活塞,产生约2,000巴的压力。
血小板
膜血小板徕卡EM PACT2是唯一可以安全密封的系统,因为样品一旦被引入容器,就会被指定的表面密封。这不是所有其他可用的高压冻结系统的血小板系统的情况。
控制实验
检查微生物是否活着和健康。图3显示了相应的生长曲线。肺炎链球菌的培养和离心。取0.5µl颗粒
- (阳性对照)移液到10ml培养基中
- (阴性对照)取0.5µl无菌培养基移入10ml培养基中。
结果
细菌是健康的(图3,红线),培养基是无菌的(图3,灰线)。
实验1
用样品的小颗粒填充膜血小板。细菌(肺炎链球菌)培养并离心。取0.5µl的颗粒填充到膜状血小板中(约0.35µl),将血小板固定在荚果中。
血小板必须正确填充。过量填充以及在血小板中放入足够数量的样品会导致血小板在高压冷冻期间严重变形(更多信息见[1].
对固定在罐内的血小板进行消毒
一旦血小板被安装在豆荚中,它就会在Gigasept中消毒,然后用双蒸馏水冲洗。
通过封装在荚果中(图7,绿松石线)检测细菌是否存活,以及荚果、操纵器和血小板表面是否无菌(图7,绿线)。
结果
青绿色曲线证明血小板含量未受影响。微生物在豆荚里是活的。绿色曲线表示消毒后荚果表面无活菌。
实验2
检查压力对细菌活力的影响(图9,红线),以及密封在荚膜内的血小板是否渗漏(图9,橙色线)。
与图4-6所示程序相同,但在检查体外血小板和荚膜中的血小板含量之前,对样品加压,不冷冻。
结果
橙色线(图9)表明,在加压过程中,荚果保持密封状态(没有细菌生长),然而,容器中的细菌在加压过程中存活了相当高的程度(图9中的红线)。
实验3
检查高压冷冻对细菌生存能力的影响(图11,深蓝色线),加压冷却后密封在荚膜内的血小板是否有泄漏(图11,淡蓝色线)。
步骤与图4-6所示相同,但在检查细菌生长之前,将样品高压冷冻。
结果
淡蓝色的线表示样品是密封的。经过高压冷冻循环后,封闭的豆荚上没有细菌。然而(深蓝色线)令人惊讶的是,部分内容仍然是活的。这意味着细菌可以在高压冷冻和随后的解冻中存活!!
结论
- 肺炎链球菌能在高压冷冻中存活(当样品容器泄漏时很危险)。
- 在徕卡的荚果中固定的制备好的膜血小板的含量新兴市场PACT2加压或高压冻结时不泄漏。
- 仔细的准备是安全高压冷冻的先决条件。
最后但同样重要的是:
- 如果发生,作者不承担责任样品泄漏。