介绍
DED背后的机制还没有被很好地理解。DED通常表现为轻微不适。然而，随着病程的延长，视力模糊和生活质量下降也会发生[1]．虽然DED很常见，但其发病机制尚不清楚。特别是，黏蛋白及其糖基化水平在DED的发展和进展中的作用尚不清楚[1]．在眼睛中，跨膜和可溶性分泌的粘蛋白协同提供屏障和润滑功能，以对抗环境质问。本研究的重点是在细胞膜上可视化o聚糖的存在，这是哺乳动物糖蛋白的特征，如粘蛋白1。令人惊讶的是，在膜脊上也观察到高浓度的o聚糖，支持它们在上皮屏障功能中的潜在作用。此外，粘蛋白1被假设为边界润滑剂，协助眨眼运动。润滑或屏障过程的功能障碍都可能导致DED。本研究采用人角膜上皮细胞评估糖基化粘蛋白1的表达水平。
挑战
当对分层的人角膜细胞表面的粘蛋白成像时，共聚焦显微镜可用于取蛋白质单层的z层，但它可能会相当耗时。一种能够快速成像细胞表面的粘蛋白并实现清晰、高对比度的3D成像的解决方案更加实用，重要的细节可以清晰地分辨出来。传统的广角显微镜速度快，检测灵敏度高，但不幸的是，厚标本的图像经常显示失焦模糊或雾霾，这降低了对比度[2]．
方法
将分层的人角膜上皮细胞固定，并在第3天用Hoechst(蓝色，标记细胞核中的DNA)、Alexa荧光团结合的粘蛋白1抗体(红色)和荧光标记的jacalin凝集素(绿色)免疫荧光染色。[1]．Jacalin染色表明细胞膜上存在o -聚糖。细胞用THUNDER成像仪组织成像。用3个通道在40秒内采集了包含44片、总厚度为11.8 μ m的z-堆栈(图1)。对图像应用LVCC(大体积计算清除)，然后进行扩展景深(EDoF)投影。
结果
使用THUNDER技术以光数字方式去除失焦模糊，从而能够分辨常规广角显微镜成像时看不到的膜脊。LVCC和EDoF的结合使得一张投影图像中所有平面的细节都能清晰地显示出来。
结论
雷声技术大容量计算清理(LVCC)[2]当成像人类角膜上皮细胞时，显著增强对比度，允许膜脊被解决，这是传统的广角成像无法实现的。